高粱中单宁含量的测定——中华人民共和国国家标准

Sorghum－Determination of tainnin content

GB/T 15686－1995

本标准等效采用国际标准ISO 9648：1988《高粱中单宁含量测定方法》。

1  主题内容与适用范围

本标准规定了高粱中单宁含量的测定方法。

本标准适用于高粱中单宁含量的测定。

2  引用标准

GB 5491  粮食、油料检验  扦样、分样法

GB 5497  粮食、油料检验  水分测定法

3  原理

用二甲基甲酰胺溶液振荡提取高粱单宁。过滤后取滤液，在氨存在的条件下，与柠檬酸铁铵形成一种棕色络合物，用分光光度计在525nm波长处测定其吸光度值，与标准系列比较定量。

4  试剂及溶液

所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

4.1  单宁酸标准溶液：2.5g单宁酸溶于水中，定容至1000mL。该溶液避光、低温保存，一周内稳定。单宁酸标准来源不同，对测定结果有影响。因此，推荐使用分子量为1701.25的单宁酸作为标准品，并且配制0.3mg/mL的单宁酸标准溶液，按6.5.2测得吸光度值应在0.45～0.55范围之内。

4.2  8.0g/L氨溶液：取浓氨水（25%～28%）3.6mL，定容至100mL。

4.3  75%(V/V)二甲基甲酰胺溶液：取75mL二甲基甲酰胺，加水约20mL，混匀，放至室温，然后定容至100mL。

注:意：二甲基甲酰胺对肺、皮肤和眼睛有伤害。

4.4  3.5g/L柠檬酸铁铵溶液：柠檬酸铁铵试剂铁的含量在17%（m/m）～20%（m/m）之间；3.5g/L溶液，使用前24h配制。

5  仪器

5.1  分析天平；感量0.0001g。

5.2  机械粉碎机；带孔径为1.0mm的筛子。

5.3  中速滤纸。

5.4  振荡机。

5.5  可见分光光度计：10mm比色皿。

5.6  移液管：50mL。

5.7  刻度移液管：1mL、10mL。

5.8  试管。

5.9  容量瓶：25mL。

5.10  具塞三角瓶：100mL。

6  分析步骤

6.1  试样制备

    按GB 5491取样。

样品弃去杂质，用机械粉碎机粉碎，并全部通过1.0mm孔径的筛子，充分混匀。

粉碎的高粱试样在避光、干燥的条件下最多保存几天。因此，试样粉碎后应尽快测定。

6.2  水分测定

    按GB 5497测定试样水分含量。

6.3  提取

称取试样约1g，精确至0.0001g，置于100mL三角瓶中，准确加入50mL 75%二甲基甲酰胺溶液，加塞子密封，于振荡机上振荡60min，然后用双层滤纸过滤，滤液备用。

6.4  测定

6.4.1  用称液管吸取提取液（6.3）1.0mL，置于试管中，用移液管移加6.0mL水和1.0mL氨溶液，振荡均匀、静置。自加氨水10min后，以水作空白，用分光光度计在525nm波长处测定吸光度值。

6.4.2  用移液管吸取提取液（6.3）1.0mL，置于试管中，用移液管移加5.0mL水和1.0mL柠檬酸铁铵溶液，振荡均匀，再加1.0mL氨溶液，充分振荡均匀、静置。自加氨水10min后，以水作空白，用分光光度计在525nm波长处测定吸光度值。

结果为两次测定吸光度值之差。

6.5  绘制标准曲线

测定试样的当天，按以下步骤绘制标准曲线。

6.5.1  用移液管准确吸取0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL单宁酸标准溶液（4.1），分别置于6个25mL容量瓶中，用75%二甲基酰甲胺溶液稀释至刻度（标准溶液系列分别相当于0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg/mL单宁酸含量）。

6.5.2  用移液管分别吸取以上单宁酸标准溶液系列1.0mL，置于6只试管中，各准确加入5.0mL水和1.0mL柠檬酸铁铵溶液，振荡均匀，再各加1.0mL氨溶液，充分振荡均匀、静置。自加氨水10min后，以水作空白，用分光光度计在525nm波长处测定吸光度值。

6.5.3  以吸光度值作纵坐标，单宁酸标准溶液系列中单宁酸含量（mg/mL）作横坐标，绘制标准曲线。

7  结果计算

高粱单宁含量以干基中单宁酸质量的百分数来表示，按下式计算：

单宁（%）＝

式中：c――试样提取液测定结果（6.4），从标准曲线上查得相当的单宁酸含量，mg/mL；

m――试样质量，g；

Ｈ――试样的水分，%。

8  重复性

由同一操作者同时或连续两次测定结果的允许误差不超过0.1%，取两次测定的平均值作为测定结果（保留小数点后第二位）。

附加说明：

本标准由中华人民共和国国内贸易部提出。

本标准由国家粮食储备局归口。

本标准由郑州粮食学院负责起草。

本标准主要起草人霍权恭、范璐、周展明、朱之光、蔡凤英。