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线粒体膜电位 JC-1 Mitochondrial Membrane potential ---本中心流式细胞仪常规检测项目(4)

(2016-02-12 12:56:00)
分类: 检测项目

检测原理:

      以JC-1 为荧光探针,快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位的变化,可以用于早期的细胞凋亡检测,也是用来检测细胞早期凋亡的常用方法。

JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针,JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内。正常线粒体内,JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物,聚合物发出强烈的红色荧光(Ex=585 nm, Em=590 nm);不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失,JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中,产生绿色荧光(Ex=514 nm, Em=529 nm)。
     JC-1不仅可用于定性检测,因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测,因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时,只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

     线粒体膜电势的破坏是细胞凋亡早期发生的一个标志性事件。细胞受到凋亡诱导后线粒体膜电位的变化使得膜的通透性发生改变。膜通透性的增加,使得线粒体蛋白包括细胞色素C等凋亡诱导因子从线粒体基质释放到细胞浆。细胞色素C的释放伴随膜电位的完全丧失,进而引发细胞凋亡酶的级联效应。

染色步骤:

1.收集细胞:包括漂浮在培养基上的细胞;之后,PBS或培养基重悬送样,正常组细胞分出200μl体积不染色;

2.离心:1000转/分,5分钟,弃上清;

3.染色:加入200μl JC-1染液,混匀,37℃避光孵育15分钟,上机;

4.(可选)洗涤:加入500μl 洗液;

5.(可选)离心:1000转/分,5分钟,弃上清,加入200μl 洗液,混匀,上机。

数据分析:

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