硫代修饰的寡核苷酸主要用于反义实验中防止被核酸酶降解。你可以选择全硫代，但随着硫代碱基的增加，寡核苷酸的Tm值会降低，为了降低这种这种影响，可以对引物两端2-5个碱基进行硫代修饰（许多人选择5'和3'各3个碱基进行硫代修饰。

反义技术的基本机制是在mRNA

Fermentas公司T4连接酶单位为Weiss u

1 Weiss unit= 200 CEU,即：cohesive-end ligation unit=0.005weiss u

NEB公司T4连接酶单位为粘性末端单位（CEU）

1Weiss unit= 67 CEU；即：1 cohesive-end ligation unit=0.015 Weiss unit
Takara公司T4连接酶单位为粘性末端单位（CEU）

 1Weiss unit= 125 CEU；即：1 cohesive-end ligation unit=0.008 Weiss unit

三种T4连接酶单位定义

（1）Weiss单位

连接酶单位最早是1968年由Weiss提出的Weiss单位，现也称PPi单位。他的单位定义为：37℃ 20min

分子式：C₁₄H₂₂O(C₂H₄O)_n

用途：Triton X-100是一种比较温和的去垢剂（表面活性剂或称界面活性剂），常作为添加剂使蛋白保持稳定，尤其是膜蛋白。

性质：

1. Triton X-100对细菌等微生物没有杀伤作用。
2. Triton X-100在紫外波段下有光吸收（lambda max = 275 nm and 283 nm in methanol），因此，当缓冲液中存在Triton X-100时不能通过测定280nm光吸收来进行蛋白定量。
3. Triton X-100常与CHAPS等zwitterionic 去垢剂一起使用来纯化膜蛋白，使膜蛋白保持其天然构象。
4.Triton X-100可以提高真核细胞细胞膜的通透性，因此在Immunostaining时常使用含 0.1%-0.5%Triton X-100的PBS或TBS。
5. Triton X-100非常稳定，密封避光 +2-8℃条件下可以长期保存。
6.Triton X-100是透明，略显粘稠，稍微发黄的

磷酸化（Phosphorylation）

5'磷酸化可用于接头，克隆和基因构建以及连接酶催化的连接反应。3'磷酸化可抗3'外切酶消化的相关实验中，也用于阻止DNA聚合酶催化的DNA链延伸反应。

生物素（Biotin）

卵白素-生物素（avidin-biotin）技术应用广泛，包括用于非放射性免疫分析来检测蛋白质，胞内化学染色，细胞分离，核酸分离，杂交检测特异性的DNA/RNA序列，离子通道构象变化的探针等。功能化的生物素还可用在已包被的固相表面的的固定。最近也在探讨将这项技术用于光降解的生物素产品。所有这些应用需要包含有一个或多个的生物素标记的的特异性寡核苷酸。

地高新 （Digoxigenin）

地高新是一种从毛地黄植物分离出来的类固醇物质，因为毛地黄

酚：氯仿：异戊醇＝25：24：1
产品简介：本试剂是由Tris饱和酚、氯仿和异戊醇按25:24:1的体
积比混合而成的，主要用于基因组DNA的提取等试验。
注意事项：本试剂有较强的腐蚀性，应尽量避免皮肤接触或吸入体内。如发现变为红色或棕色，表明已发生氧化，不能继续使用。本试剂分为两层，上层为保护水相，下层为酚氯仿异戊醇。
保存要求：4℃，避光保存，有效期12个月。

1。酚的作用：（1）有效变性蛋白质；（2）抑制了DNase的降解作用。
2。氯仿的作用：加速有机相与液相分层。最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）
3。异戊醇的作用：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定 

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