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rna

提取试剂盒

(2016-07-21 14:46)
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qpcr

样本取样要求

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杂谈


http://mmbiz.qpic.cn/mmbiz/Z0TTDjugU4T6HE7VKt7YQdWm3PsBqbnrQ4icg1yJ9o6HEOzPY4ichudVnGABsmGrQo7BBLRFb2GafJW46OOO7Oyw/640?wx_fmt=jpeg&tp=webp&wxfrom=5

LncRNA 引物到底和mRNA 引物设计有什么不同?


序列提供的数据库更多样;

mRNA 序列通常在ncbi的库里就可以找得到,而lncRNA数据库,就比较多了;

建议客户提供二代测序的测序结果或者基因芯片筛选后的探针序列,方便进行引物设计;

序列更复杂,需要更加明确的基因比对;部分序列由于和mRNA 某转录本序列太接近,而不能设计相应的QPCR 引物;

根据序列比对情况,可以明确,是否可能设计特异的lncRNA, 或者设计的引物同时会检测其他基因;

实验可能会更复杂,部分lncRNA 可能不含polyA 尾,所以在常规的CDNA 中不含;需要以RNA 为模板,直接进行特异性逆转录和检测;

在样本中可能含量很低,需要更灵敏的检测方法;

 

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pcr

qpcr

Q问题: 普通PCR 和 QPCR 引物 是否一样?


A 回答:     二者的设计原则有相同也有不同;


相同处:
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rt

pcr

microrna

Stem-loop实时定量RT PCR

传统实时定量RT PCR只能检测到miRNA前体,而Stem-loop实时定量RT PCR技术可以解决这一问题。Stem loop实时定量RT PCR是一项高特异度、敏感度的检测miRNA表达的实验技术,包括设计具有茎环(stem loop)结构的反转录引物和用miRNA荧光标记的特异分子探针进行实时PCR 二个关键步骤。该技术具有以下优点:高度特异性,对序列高度同源的miRNA也可精确区分;超宽的定量线性范围和高度的检测灵敏度;样品消耗少,仅需1~10 ng的总RNA;适用范围广,总RNA、细胞裂解物以及纯化的RNA都可用于miRNA的定量检测。

Stem-loop实时定量RT PCR基本原理: microRNA的RT-PCR一般使用茎环结构的

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raybiotech

g系列蛋白芯片操作说

raybiotech  AAH-GF-G1芯片操作流程

(参见英文protocol

1.实验材料及试剂

 

(2016-03-17 13:03)
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如何查找基因




 要怎么搜Actin这个基因。

 

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qpcr引物篇

如何针对引物序列进行

blast

确定引物是否可用

如何使用文献的引物才更可靠?

如何利用ncbi数据库进行引物的blast?

 

 

引物从文献中得到后,或者由公司提供得到后,比较稳妥的方式是在ncbi网站上对上游和下游引物分别进行Blast分析。

具体方法是:

google 搜索blast,点击,进入ncbi的blast 网站:

 

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qpcr引物篇

普通pcr和qpcr引物

是否一样

Q问题: 普通PCR 和 QPCR 引物 是否一样?

 
A 回答:     二者的设计原则有相同也有不同;
 
 
相同处:
         序列的查找是一致的;
    
  

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