常见的实验室细胞传代方法有贴壁细胞用消化法传代和悬浮生长的细胞采用离心分离后传代。贴壁细胞消化时，因细胞对胰酶的敏感程度不同，所以消化时间差别较大。对于初学者，消化的程度也很难掌握好，加入适量胰酶，轻轻摇晃3-4

介绍

  20 世纪人们将电镜技术与免疫学方法相结合,逐步形成了免疫电镜检查术。1971年，Faulk和Taylor首次用胶体金标记抗体，取得了较满意的结果。1983年，Holgate等加以改进,将免疫金染色与银显影技术相结合,建立了免疫金银染色法(immunogold silver staining, IGSS)。近年来,胶体金标记技术得到进一步发展，已广泛应用于免疫转印、流式细胞术、液相免疫测定、固相斑点金/银、斑点金免疫渗滤及免疫层析。胶体金标记抗体技术的引入无疑是免疫电镜发展过程中的又一个里程碑。

特征性质 

  1原理

  胶体金是表面带负电荷的疏水性颗粒，颗粒之间的静电排斥力使它们在水溶液中保持溶胶状态。胶体金溶液呈红葡萄酒颜色，大颗粒胶体金溶液呈紫红色。氯金酸 （HAuCl₄）在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。

  2前提

  胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合而不影响蛋白质的

转染实验（脂质体转染法）：

   原理：脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层，又称为人工生物膜。具有膜的融合及内吞作用，可用作外源物质进入细胞的载体。相对于电穿孔法和磷酸钙共沉淀转染法，脂质体介导转染法简便易行，成本适中，具有较高的转染率和较小的细胞毒性

   细胞处于旺盛增殖期后，消耗了培养基中的营养，产生的细胞代谢产物对细胞继续增殖产生不利影响，因此需要及时更换培养基，这一过程称为换液。

环境准备：相对密封、防尘、防菌的无菌室

  本实验室为上海正规高校实验室，现代做细胞培养服务100元/天，细胞转染技术600元（细胞质粒自己提供）。为您提供实验报告书(实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等)。因本实验室自己科研量也较多，如需此服务的同学请在线或提前来电预约：13661449330，宋老师。

细胞铺板（以贴壁细胞铺6孔板为例）

环境准备：相对密封、防尘、防菌的无菌室

操作者准备：双手清洁呈可操作状态

物品准备：超净工作台、CO2培养箱、95%酒精灯、巴氏吸管、75%酒精棉球罐、废液缸、培养瓶、含10�S的培养基、6孔板、PBS、0.25%trypsin

(a)铺板步骤：

①取适量75%酒精棉球擦拭超净工作台面→各种物品按顺序摆放整齐→点燃酒精灯

②将细胞制成单细胞悬液

 ③按一定要求种植于培养器皿中

（b）注意事项：1、全程无菌观念要强；

               2、铺板后要“十字法”摇匀。

  细胞都附着到培养板表面以后，如果需要换液，只需用移液枪吸出旧的培养基，然后加入预先温到37度的新鲜培养基即可。

细胞复苏后是否不能将复苏后的细胞直接铺板,必须传一代后再铺,为什么,可以直接铺板吗,这样对细胞的功能有没有什么影响？

最好传过一代之后再铺板，因为刚刚复苏的细胞生长状态以及功能并不能完全恢复到正常，曾经比较过复苏后直接铺

   脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层，又称为人工生物膜。具有膜的融合及内吞作用，可用作外源物质进入细胞的载体。相对于电穿孔法和磷酸钙共沉淀转染法，脂质体介导转染法简便易行，成本适中，具有较高的转染率和较小的细胞毒性阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用将

细胞传代培养方法：贴壁细胞用消化法传代

悬浮生长的细胞采用离心分离后传代

细胞传代步骤

环境准备：相对密封、防尘、防菌的无菌室

操作者准备：双手清洁呈可操作状态

物品准备：超净工作台、CO2培养箱、相差倒置显微镜、离心机、95%酒精灯、PBS、0.25%trypsin（较常用）、10�S（DMEM）(根据需要)、巴氏吸管、25mm培养瓶（根据需要）、75%酒精棉球罐、废液缸

贴壁细胞传代步骤：

①   取适量75%酒精棉球擦拭超净工作台面→各种物品按顺序摆放整齐→点燃酒精灯；

 Transwell是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（