菌株 DH5α
质粒 pEGFP+target gene
1月前,已经转化好的菌,摇后抽质粒,酶切,都正常。但此质粒做转化,挑克隆(克隆长得很好),抽质粒,电泳——什么也没有或条带很暗。卡那霉素按质粒说明书30ug/ml。卡那霉素失活?
新到的硫酸卡那霉素,重新配!母液100mg/ml,0.22um过滤。为了检验卡那的抗菌能力,设计实验:
5个卡那浓度梯度(终浓度)
1. 60ug/ml
2. 100ug/ml
3. 160ug/ml
4. 200ug/ml
5. 300ug/ml
此梯度下每5ml LB培养基接种30ul DH5α(空菌), 12h后察混浊度。
早上 全都变混了!!卡那霉素作用没起?分析原因:
1.DH5α突变获得抗性——更换新菌
2.DH5α发生质粒污染,获得抗性——抽个质粒看看
3.卡那霉素有问题或是处理不当?