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质粒的复制子决定其拷贝数

(2014-10-20 09:43:32)
标签:

分子生物学

摘自:优尔生门户网站 www.uscnk.cn

复制子是一个遗传单位,包括DNA 复制起点及其相关的调控元件。在质粒中,复制起点是一段特定的DNA片段,长约几百碱基对,其相关的顺式作用调控元件中含有参与DNA合成起始的由质粒或 宿主编码的可扩散因子的结合位点。因此,质粒复制子可被定义为质粒DNA中能自主复制并维持正常拷贝数的一段最小的核酸序列单位。
    在质粒中已鉴定的复制子已逾30个。但是,目前在分子克隆中常规使用的几乎所有的质粒都带有一个来源于pMB1的复制子,该质粒最初是从一例临床标本中 分离到的(Hershfield et al. 1974)。带有该复制子[或有亲缘关系与之十分接近的大肠杆菌E1(colE1)复制子(Balbas et al. 1986)的质粒在每个细菌细胞中可维持15~20个拷贝。然而多年来,pMB1/colE1复制子已经被大量改造以增加拷贝数,从而提高质粒DNA的产 量。高拷贝数的质粒载体广泛应用于分子克隆及几乎所有小片段重组DNA(<15kb)的常规操作中。相反,带有非pMB1/colE1来源的复制子 (见下表)的低拷贝载体则用于某些特定目的,其中包括:①不稳定的DNA序列的克隆及在高拷贝数质粒增殖时具有致死效应的基因的克隆;②构建细菌人工染色 体(BAC),即用于以大肠杆菌质粒的形式扩增大片段(~100kb)外源DNA的载体。


表1 质粒载体携带的复制子http://www.uscnk.cn/news_pic/201202151458.jpg 



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