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细胞凋亡概念及其特征

凋亡(apoptosis)

程序性死亡，机体为更好地适应生存环境而采取的一种主动死亡过程。
http://www.liankebio.com/public/images/ee/fd/41/b76a95809db31368d0ab3ea340bba1f12f6b6eb5.png?1498093250#w

凋亡研究热度分析

细胞凋亡与疾病：

细胞凋亡热点问题：

►   细胞接受胞外信号的刺激启动凋亡

►   胞内凋亡特异性蛋白酶（如Caspase）的活化

►   线粒体对凋亡的调控

►   Bcl-2蛋白家族对凋亡的调控

凋亡分期

凋亡检测 —— Annexin V

关键技术 9项

1，接种 对数生长

细胞密度通常不超过1×106/ml，以免引起凋亡

2，收集 上清消化全收

因部分凋亡细胞可能悬浮于培养基中，须先收集上清，离心收集沉淀，再消化收集贴壁细胞，合并上清和消化下来的细胞。

3，消化 Accutase

避免因消化过度使PS外翻，造成假阳性。

用eBioscience的Accutase酶替代胰酶，在多种细胞系中得到验证，对细胞更温和、长时间消化也没有影响。
（对凋亡不明显的实验强烈推荐）
使用细胞消化液－－实际效果比较
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4，阳性质控 联科 Multisciences

没有明显的凋亡，该如何调节补偿以及设门？

联科凋亡试剂盒配备阳性质控液，使补偿调节so easy

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5, 方案 4管 单双混合

染色：1, Blank、2, Annexin V、3, PI、4, Annexin V+PI

上机：1, Blank、2, 50%Blank +50%Annexin V、3, 50%Blank +50% PI、4, 50%Blank+50%Annexin V+PI、
             5, 50%Blank+25%Annexin V+PI+25%Annexin V

6，电压 足够大http://www.liankebio.com/public/images/77/0d/36/2b28fa8a6d12ca839b8adf7d7557e23bb1e9d01c.png?1498094564#h

大到快要超出边界。

7，细胞数量 足够多

多到细胞全部收集。

8，补偿 横平竖直

3、4象限横平；2、4象限竖直

9，漂亮图片

黄金分割（三分原则）。

 

关键技术 9项