ELISA实验结果常见问题及解决方案——标准曲线不佳_联科生物

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ELISA实验结果常见问题及解决方案——标准曲线不佳

(2017-01-20 11:36:44)

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分类： ELISA

ELISA实验加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品最高点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等，总结如下原因：

ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出仪器检测范围，显示OVER FLOW，可能原因：

序号	可能原因	解决方法
1	如OD绝对值靠谱，则显色过度	TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。
2	仅作单波长检测	由于参考波长读取非特异性检测，如指纹、划痕、水渍等，对结果也有影响。建议最终结果以双波长为最准确。

ELISA标准曲线最高点的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：

序号	可能原因	解决方法
1	粉末标准品未充分溶解	粉末标准品按说明书加一定体积的液体后，轻柔混匀，室温静置30分钟，充分溶解。
2	标准品反复冻融	标准品反复冻融后活性降低。
3	孵育温度、时间	按说明书要求孵育条件进行孵育。
4	显色时间控制	TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。

ELISA 实验中标准品2倍倍比稀释，但结果分析标准曲线没有梯度，可能的原因：

总结得到完美ELISA标准曲线，需要注意几点：

1、充分溶解标准品；

2、标准品避免反复冻融；

3、梯度稀释标准品注意混匀。

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