由于加入生理盐水能降低甘油的高渗作用，因此甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液。此方法保藏菌种时间一般为2-4年。其主要原理是靠低温来降低微生物活性，达到保存的目的。加甘油是为了避免水结冰产生冰晶损伤细胞，甘油还有隔绝空气、衡湿、调节渗透压、并在冷冻过程中起冷冻保护剂的作用。

关键词： 菌种保藏

本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。其主要原理是靠低温来降低微生物活性，达到保存的目的。加甘油是为了避免水结冰产生冰晶损伤细胞。在细胞和病毒的冻存过程中，会形成冰晶损伤和溶质损伤，加入甘油的目的是为了防止这两者对细胞和病毒的损伤。甘油还有隔绝空气、衡湿、调节渗透压、并在冷冻过程中起冷冻保护剂的作用。

保存方法：
（1）配制50%的甘油-生理盐水：将甘油和生理盐水按1:1（v/v）比例混匀，高压灭菌，放置于4℃冰箱待用。

（2）将鉴定好的细菌接种于液体培养基，在细菌的最适温度下培养至菌液OD600为1.0-1.5。

（3）将新鲜培养的菌液与50%甘油-生理盐水按1:1（v/v）比例混匀后，分装于事先灭菌的菌种冻存菌，-70℃或液氮保存。

该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水降低了甘油的高渗作用。