培养基高压蒸汽灭菌操作步骤： 121℃, 20min（15-30min）

1. 首先将内层锅取出，再向外层锅内加适量的水，使水面与三角架相平为宜。

注意：切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅干而引起爆炸事故

2. 放回内层锅，并装入培养基灭菌物品。

注意：不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角瓶与试管口端不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞

3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。

4. 加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制电源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MP，121.5℃，20分钟灭菌。

注意：灭菌的主要因素是温度而不是压力。故锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。

5. 灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。

注意：压力必须降至“0”时才能打开排气阀，开盖取物。否则，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。