加载中…细胞冻存和复苏实验经验总结
(2014-03-11 13:15:05)
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细胞冻存复苏培养 |
分类： 细胞培养 |
冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
保存细胞的复苏方法
1. 快速解冻
冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1 分钟内全部融化（不要超过3 分钟）。
2.
解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。
3. 如果细胞对冷冻保护剂特别敏感
解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。
针对细胞复苏，一点经验总结 ：1. 可以提前把需要的体积的培养液放到培养瓶里，拧松瓶盖，放到孵箱里半小时到1小时；2.
为防止冻存管在升温时爆裂等，可以在放入水浴前就实现在超净台里把盖子拧松一下然后再拧上；3.
水浴温度40℃应该也没问题，但正规的protocol上从来都只说37℃。
冻存细胞复苏后，可以再做流式检测细胞表型吗？
只要冻存复苏条件都按程序来，即确保细胞复苏成功，就可以做了，当然细胞复苏后最好是培养一段时间使细胞调整到正常状态。
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