细胞铺板（以贴壁细胞铺6孔板为例）

环境准备：相对密封、防尘、防菌的无菌室

操作者准备：双手清洁呈可操作状态

物品准备：超净工作台、CO2培养箱、95%酒精灯、巴氏吸管、75%酒精棉球罐、废液缸、培养瓶、含10�S的培养基、6孔板、PBS、0.25%trypsin

(a)铺板步骤：

①取适量75%酒精棉球擦拭超净工作台面→各种物品按顺序摆放整齐→点燃酒精灯

②将细胞制成单细胞悬液

 ③按一定要求种植于培养器皿中

（b）注意事项：1、全程无菌观念要强；

               2、铺板后要“十字法”摇匀。

  细胞都附着到培养板表面以后，如果需要换液，只需用移液枪吸出旧的培养基，然后加入预先温到37度的新鲜培养基即可。

细胞复苏后是否不能将复苏后的细胞直接铺板,必须传一代后再铺,为什么,可以直接铺板吗,这样对细胞的功能有没有什么影响？

最好传过一代之后再铺板，因为刚刚复苏的细胞生长状态以及功能并不能完全恢复到正常，曾经比较过复苏后直接铺板与传代后再铺的效果，发现后者才是合适的做法。

细胞计数法是用血细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数目，以测定细胞增殖和调整细胞浓度。当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

物品准备：血细胞计数板、盖玻片、培养液、胰酶、PBS

（a）细胞计数步骤：

①将细胞制成细胞悬液(步骤见传代)；

②将盖玻片放在血细胞计数板的2个小室上；

③ 吸取少许细胞悬液轻轻注入盖玻片边缘与计数板交界处；

④ 100倍镜下，用计数器计数每个小室的中央和四角的方格中的细胞

⑤只计数压左边中线和上边中线的细胞

⑥分别用双蒸水和75%酒精清洗计数板、盖玻片，并擦干。

（b）注意事项：细胞悬液要充分混匀，以免计数结果出现误差。

                每个大方格中的细胞密度以20~50个为宜。