细胞传代培养方法：贴壁细胞用消化法传代

悬浮生长的细胞采用离心分离后传代

细胞传代步骤

环境准备：相对密封、防尘、防菌的无菌室

操作者准备：双手清洁呈可操作状态

物品准备：超净工作台、CO2培养箱、相差倒置显微镜、离心机、95%酒精灯、PBS、0.25%trypsin（较常用）、10�S（DMEM）(根据需要)、巴氏吸管、25mm培养瓶（根据需要）、75%酒精棉球罐、废液缸

贴壁细胞传代步骤：

①   取适量75%酒精棉球擦拭超净工作台面→各种物品按顺序摆放整齐→点燃酒精灯；

②   培养箱中取出需要传代的细胞→吸管吸除培养瓶内旧培养液弃之；

③   加入适量PBS清洗细胞两次；

④   加入0.5~1ml胰酶后，置CO2培养箱中或室温25℃消化2~5分钟；

⑤   肉眼见出现针尖样发白间隙；或显微镜下观察，发现胞质回缩、细胞间隙增大；

⑥   直接加少许含血清的培养液，终止消化；

⑦   细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液，按要求分别接种在新的培养瓶内；

⑧   放回CO2培养箱继续培养。

悬浮细胞的传代步骤：

①   直接传代即让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清洗掉1/2 ~ 1/3，然后用吸管吹打形成细胞悬液后，再传代.

②   离心法：离心800 ~ 1000rpm，5min，弃上清，加新的培养液，然后按一定比例传代接种.

（c）注意事项：1、全程无菌操作观念要强；

               2、吸管尽量不要划到细胞贴壁的面；

               3、清洗细胞及加胰酶消化时，液体不可直接打到细胞贴壁的面上；尽量轻轻从侧壁加入，液体以能覆盖细胞表面为宜；

               4、吹打细胞时动作易轻柔，尽量不要出现大量气泡。

               5、细胞未贴壁之前，不要随意移动。

细胞换液步骤:

①    取适量75%酒精棉球擦拭超净工作台面→各种物品按顺序摆放整齐→点燃酒精灯

②     培养箱中取出需要传代的细胞→吸管吸除瓶内旧培养液；

③    取适量PBS清洗细胞（此步骤也可省略）

④    补足新培养液

⑤    放置于CO2培养箱

注意事项：1、全程无菌操作观念要强；

             2、加培养液时，不可直接加到细胞贴壁的面上

   另本实验室除了提供细胞原代，细胞传代，细胞株等技术服务以外，还提供细胞培养方面的技术培训，主要包括：全套细胞（复苏，冻存， 传代，计数）的规范培训，原代细胞的培养， 肿瘤干细胞的富集培养，肿瘤干细胞的流式分选，基因转染，功能获得与缺失等。以上技术只针对高校本科以上学员及高校技术人员。