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原代细胞和传代细胞培养的区别及分裂能力

(2013-09-02 09:45:37)
标签:

细胞

培养

原代

传代

分类: 细胞培养

  原代培养的一般是从活体组织中获取的细胞,细胞体系比较复杂,不稳定,比如肿瘤组织的原代培养细胞会含有肿瘤细胞、淋巴细胞、血管内皮细胞等等。一般传代的细胞指的是已经趋于稳定的单一细胞系。原代培养一般培养到十代左右,传代培养可以培养至50代,甚至个别细胞发生突变形成类似于癌细胞无线增值,原代培养具有两个特点接触抑制和贴壁生长。

  原代培养细胞会分裂。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了,细胞的生长就会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。传代培养一般传到40-50代,这种传细胞叫细胞株。细胞株的遗传物质没有改变。其分裂能力与原代培养的一样。当细胞株传至50代以后又出现“危机”,不能再传下去,但有的细胞遗传物质发生改变,并带有癌变的特点称细胞系。这部分细胞的分裂能力比原代培养的强得多。它有无限增殖的特点。

细胞培养传代时细胞抱团怎么办?

  贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后,继续生长的空间不足,培养基中的营养成份也消耗较多,同时代谢废物也有较多堆积,需要分瓶培养,对细胞进行传代扩增。对于贴壁不太紧的细胞如293,可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO,则需要以胰酶消化后再吹散分瓶,一般过程为(以下操作均按无菌操作的要求进行):将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去;加入0.25%胰酶溶液,视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多,以使充分浸润;一般消化时间约为1至3分钟,肉眼观察瓶壁半透明的细胞层,当见到出现细针孔空隙时,弃去胰酶溶液,并加入适量的细胞培养液终止消化;视实验要求分入多瓶继续培养,一般为一传二到一传四的比例。
这里,胰酶消化的程度是一个关键:消化过度则对细胞的活性损伤较大,并有部分细胞漂浮,随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下,反复吹打同样也会损伤细胞活性。影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等。以笔者的经验,以轻吹或加培养液后轻摇可下较好,但对于经验不太充分的实验者而言是较难判断掌握的。

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