加载中…全血中提取DNA/RNA注意点-可提取白细胞、细菌、肿瘤细胞中基因组
(2019-12-18 11:50:00)
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从全血中提取DNA,
基本上按照红细胞裂解—白细胞裂解（蛋白酶消化）—沉淀蛋白—沉淀DNA的过程进行，大约要注意以下几点。
1.
通常可用EDTA、柠檬酸、ACD等抗凝全血，并提取基因组DNA，最好不要用肝素抗凝。我们常用柠檬酸或ACD抗凝。
2. 抗凝全血在2-8度可保存达两个月，但随保存时间的增加，DNA的得率和完整性会受影响。
3. 对冷冻全血需重复细胞裂解步骤，以保证将红细胞完全裂解，但会减少纯化所得DNA的量。
4.
红细胞裂解后，一定要将红细胞碎片尽量去除，有时宁肯多洗几次白细胞沉淀。红细胞碎片残留太多会影响后期的PCR等操作。
5. 在白细胞块中加入核裂解液后，保温过程中轻轻吹吸数次，有助于白细胞的裂解，可以大大提高得率。
6. 蛋白酶消化过夜不是必须的。尽管用蛋白酶K处理过夜后得率会有提高。我们实验室通常消化30分钟左右。
BIOG全血DNA抽提试剂盒（BIOG Blood DNA Isolate
Kit）是常州百代生物科技研发团队在综合比较了国外同类优质产品的基础上反复研制优化而成，专门用于血液DNA的提取纯化。可从新鲜、冷冻或陈旧的全血中提取高质量的基因组DNA，也可以提取得到血液中感染的细菌或转移的肿瘤细胞DNA。可以是抗凝血，也可以是凝血块。BIOG全血DNA抽提试剂盒（BIOG
Blood DNA Isolate
Kit）采用了最新的优质进口离子膜，裂解液和洗脱液经过多次优化，提取得到的DNA产量更大，纯度更高，最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染，可以直接应用于PCR、荧光定量PCR和各种酶切试验等。
BIOG全血DNA抽提试剂盒（BIOG Blood DNA Isolate Kit）特点：
1.操作简便快速，可在半小时内获得基因组DNA；
2.提取DNA纯度高，无抑制剂，A260/A280为1.7-1.9；
3.产量高，提取量大，可在200μl的全血中提取5μg左右基因组DNA。
4.样本范围宽，可以是抗凝血，也可以是凝血块，可有效克服抗凝血中EDTA等对PCR的抑制作用。
另百代生物有BIOG凝血块DNA提取试剂盒、BIOG血液DNA快速提取试剂盒（15分钟即可完成血液DNA提取）可选。
血液的核酸含量也会因人而有所差异，再加上所使用的提取方法也有一个效率问题，如果血液充足建议多用一点。
如果你的血液是加了抗凝剂的，第一天提RNA，剩余的血液可以放4度冰箱，第二天用来提DNA完全没问题。因为血液成份复杂，且其中的RNA含量少，所以采血后请尽快提RNA。另外如果不是抗凝的，有凝血块的情况则最好研磨一下，用玻璃匀浆器。
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