一、实验目的：

    学习酵母菌种的扩大培养方法，为实验室啤酒发酵准备菌种。

二、实验原理：

    在进行啤酒发酵之前，必须准备好足够量的发酵菌种。在啤酒发酵中，接种量一般应为麦芽汁量的10%（使发酵液中的酵母量达1×10⁷个酵母/mL），因此，要进行大规模的发酵，首先必须进行酵母菌种的扩大培养。扩大培养的目的一方面是获得足量的酵母，另一方面是使酵母由最适生长温度（28℃）逐步适应为发酵温度（10℃）。

三、实验器材：

    恒温培养箱，生化培养箱，显微镜等。

四、实验步骤：

    本次实验拟用60升麦芽汁，因此应制备6000 mL含1×10⁸个酵母/mL的菌种，以每班10个组计算，每个组应制备约600 mL菌种。建议流程如下：                                                                                   

 菌种扩大:    麦汁斜面菌种→麦汁平板—_28℃，2天→镜检，挑单菌落3个，接种 50mL麦汁试管（或三角瓶）—_{20℃，2天（} ^{每天摇动3次}_）→550mL麦汁三角瓶—_{15℃，2天（}^{每天摇动3次}_）→计数备用。                 

1.  培养基的制备

取协定法制备的麦芽汁滤液（约400 mL），加水定容至约600 mL，取50 mL装入250 mL三角瓶中，另550 mL至1000 mL三角瓶中，包上瓶口布后，0.05 Mpa灭菌30分钟。

2.  菌种扩大培养

按上面流程进行菌种的扩大培养（斜面活化菌种由教师提供）。注意无菌操作。

五、注意事项：灭菌后的培养基会有不少沉淀，这不影响酵母菌的繁殖。若要减少沉淀，可在灭菌前将培养基充分煮沸并过滤。

六、思考题：菌种扩大过程中为什么要慢慢扩大，培养温度为什么要逐级下降？