加载中…流式补偿的调节教程（待整理）
(2014-06-11 15:01:15)
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分类： 流式检测和分选 |
A图与B图的区别是A图PE通道的电压调得比较合适，而B图PE通道的电压调得太低了，你可以明显发现B图的细胞好像趴在X轴上很难看。
应该说A图将调节补偿的过程描绘得还是比较详细的。调节的是PE-FITC的补偿，也就是说将PE通道中来源于FITC的荧光信号减掉，使PE通道代表PE荧光素的信号。图A1已经调了部分，但是还不够，也就是说没有将PE通道中来源于FITC的荧光信号完全去掉，还有部分存留；图A2在图A1的基础上又减了一些，但是还是不够；图A3是正确调节补偿后的结果；图A4过度调节补偿了。
应该说A图将调节补偿的过程描绘得还是比较详细的。调节的是PE-FITC的补偿，也就是说将PE通道中来源于FITC的荧光信号减掉，使PE通道代表PE荧光素的信号。图A1已经调了部分，但是还不够，也就是说没有将PE通道中来源于FITC的荧光信号完全去掉，还有部分存留；图A2在图A1的基础上又减了一些，但是还是不够；图A3是正确调节补偿后的结果；图A4过度调节补偿了。
http://s2/mw690/003rTf0zgy6JAFRiTct01&690
原文的意思是A2才是正确补偿,A3轻微经过补偿了,数年前我研究这东西耗了一个星期,并且咨询过该文章的作者。kern6549
的观点主要出现在流式仪器说明书或技术支持对补偿的阐述中，这种情况是在没有任何检测误差极端理想的情况下才会出现。
补偿是个很复杂的东西，涉及很多数学上的问题，不是学生物医学的人应该去深究的，除非你是流式操作者，并且对结果非常执着。为此我曾找了本线性代数看了一个月，如果你有兴趣可以看看2001年cytometry partA上一篇关于补偿数学模型的文章，但前提是你有足够的数学知识。
补偿是个很复杂的东西，涉及很多数学上的问题，不是学生物医学的人应该去深究的，除非你是流式操作者，并且对结果非常执着。为此我曾找了本线性代数看了一个月，如果你有兴趣可以看看2001年cytometry partA上一篇关于补偿数学模型的文章，但前提是你有足够的数学知识。
补偿的确是一个非常复杂的东西，影响补偿大小的因素也非常多，与机器的型号、通道的设置、流式荧光素的选择、抗体的浓度、测试的细胞等都会影响补偿的大小。
但是调节补偿所要达到的目的是非常明确的，具体到上面的图，图A3有轻微过补偿的观点也是可以接受的，但是如果说A2是正确调节的补偿我是不同意的，可以说A2是轻微补偿调节不足。但是，如果A2和A3二选其一的话，我肯定选择A3为正确补偿。对于第二副图的结果我也是不太同意作者的观点的。
调节补偿可以选择的荧光素偶联抗体比较多，达到我们目的的补偿设置是比较容易的，并不存在说在极端理想的条件下才能达到理想的效果之说。这位作者得出这个结论我想可能有两个原因：（1）太注重数学方面的研究了。这个大可不必，其实补偿调节不需要太精确，只要相差不是太多，得到的流式结果基本是没有问题的。而且对于非常有经验的操作者来说，有时不调节补偿也是能够得出正确结果的。另外，在流式分选的时候还有人提出不调节补偿分选效果可能会更好呢！（2）用于补偿选择的荧光素偶联抗体，可能作者选择的抗体就只能达到这个不太另人满意的效果，换一种抗体效果可能更好。
但是调节补偿所要达到的目的是非常明确的，具体到上面的图，图A3有轻微过补偿的观点也是可以接受的，但是如果说A2是正确调节的补偿我是不同意的，可以说A2是轻微补偿调节不足。但是，如果A2和A3二选其一的话，我肯定选择A3为正确补偿。对于第二副图的结果我也是不太同意作者的观点的。
调节补偿可以选择的荧光素偶联抗体比较多，达到我们目的的补偿设置是比较容易的，并不存在说在极端理想的条件下才能达到理想的效果之说。这位作者得出这个结论我想可能有两个原因：（1）太注重数学方面的研究了。这个大可不必，其实补偿调节不需要太精确，只要相差不是太多，得到的流式结果基本是没有问题的。而且对于非常有经验的操作者来说，有时不调节补偿也是能够得出正确结果的。另外，在流式分选的时候还有人提出不调节补偿分选效果可能会更好呢！（2）用于补偿选择的荧光素偶联抗体，可能作者选择的抗体就只能达到这个不太另人满意的效果，换一种抗体效果可能更好。
主要还是看需要吧，如果使用荧光素数目不多而且仅仅做阴性阳性的区分确实不需要，如果荧光素数量多的话，不当的补偿可能会使原来属于一群的细胞变成两群；如果你需要取得荧光强度的话就更糟糕了，加了抗体的荧光强度可能比空白的更低。
其实我也是过补偿的其中一分子，当你做多了会发现出来的结果是不合理而且无法解释的，后来我从数学中找到了答案。不过话说回来，现在大家都这样干，如果对结果准确性太执着的话就变成象我一样的异类了。
其实我也是过补偿的其中一分子，当你做多了会发现出来的结果是不合理而且无法解释的，后来我从数学中找到了答案。不过话说回来，现在大家都这样干，如果对结果准确性太执着的话就变成象我一样的异类了。
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