浙科版教材中提到了胚胎干细胞培养时需要制备饲养层细胞以促进干细胞的增殖同时抑制干细胞的分化，教材中提到了用胚胎成纤维细胞制备饲养层细胞。关于饲养层细胞的组分——成纤维细胞的处理方法、以及教材中提到的饲养层与滋养细胞的关系博主之前的博文中有过分享，见链接（小鼠胚胎成纤维细胞与胚胎干细胞培养、滋养细胞和饲养层细胞辨析）。今天学习总结一下细胞分化抑制的常见三种办法。

用于分离ES细胞的早期胚胎或原始生殖细胞是具有全能性的，处于快速增殖和有序分化状态，遵循着细胞分化的普遍规律，其发育潜能逐渐局限，细胞功能专一化的结果是产生具有不同分化功能的细胞、组织和器官，从而发育形成个体。分化的实质是差别基因表达的结果。因而分离培养ES细胞首先需要解决的问题就是阻止引起分化基因的激活与表达，以实现分化抑制，保证细胞的全能性。目前，常用的分化抑制物有三种：饲养层、条件培养基和分化抑制因子。

1、饲养层

饲养层是指用丝裂霉素C处理细胞单层，阻断细胞有丝分裂后所得到的细胞单层。由于饲养层细胞可以合成和分泌促有丝分裂因子(如成纤维细胞生长因子，FGF)和细胞分化抑制因子(如白血病抑制因子，LF)，因而饲养层在分离培养ES细胞中具有促进细胞的增殖和抑制细胞的分化两个方面的作用。常用的饲养层有原代小鼠胎儿成纤维细胞PMEE、小鼠胎儿成纤维细胞系STO、子宫上皮细胞UE、同源胎儿成纤维细胞HEF等。

1、条件培养基

条件培养基是指培养过细胞并含有细胞分泌物的细胞培养液。使用时以一定比例加入到ES培养基中。条件培养基的作用是利用其含有的细胞分泌的生长因子来刺激ES细胞的增殖和抑制ES细胞的分化。使用条件培养基的优点是：不仅操作简单，而且既消除了饲养层细胞的干扰，又使ES细胞免受丝裂霉素C的影响。

2、分化抑制因子

白血病抑制因子是常用的ES细胞分化抑制因子。将商品化的纯化或重组白血病抑制因子以一定浓度与饲养层共用或单独使用，均可用于ES细胞的分离和维持。