最近做到一个关于海南高考试题改编的判断题“二肽能够和双缩脲试剂发生紫色反应。”当时参考答案说这个判断正确，笔者备课时一时大意没有注意到这个细节，以为高考题怎么会有问题，谁知改编之后就很难说了。关于双缩脲试剂以及其与蛋白质显色的原理今天笔者学习了一下，分享在这里。

双缩脲反应是肽和蛋白质所特有的，而为氨基酸所没有的一种颜色反应。一般分子中含有两个氨基甲酪基（即肽键：-CO-NH-）的化合物与碱性溶液作用，生成紫色或者蓝紫色的络合物。反应名称的来源是在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H₂NOC－NH－CONH₂）能与铜离子（Cu2+）作用，形成紫红色络合物（该物质的分子结构式见图），于是该反应即称为双缩脲反应。

其中双缩脲（NH2-CO-NH-CO-NH2）是两个分子脲（即尿素）经180℃左右加热，放出一个分子氨（NH3）后得到的产物。双缩脲试剂用于通过双缩脲反应检测双缩脲，因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质，与蛋白质接触后的颜色呈紫色。

双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小。且使用试剂价廉易得，操作简便，可测定的范围为1～10mg蛋白质，适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定，能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。

双缩脲法的缺点是精确度低、所需样品量大。干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。

由上述内容可知，双缩脲试剂只能在由两个或者更多肽键的情况下才能显出紫色，二肽和尿素（由于尿素是两个（－NH₂）连在一个羧基上，所以尿素只有一个完整的肽键，不具备两个肽键的基本要求。）均不能与双缩脲试剂形成紫色络合物。