17年江苏高考生物试卷大体感觉比浙江卷要简单，基础的东西更多一点，但是考查知识点比较详细而且问题设计的灵活性更高。可能是邻居家的孩子更听话吧，第一感觉还是比较喜欢江苏卷。当然，前面评论过今年的浙江卷很棒，而且笔者对江苏的教材看过但不是很

熟悉，仅仅是个人的观点而已。今天先看看33题：

33、（8分）金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过___________获得______________用于PCR扩增。

（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的______________位点。设计引物时需要避免引物之间形成______________，而造成引物自连。

（3）图中步骤1代表______________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。

（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破_________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度。

（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________（填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物）。

本题是针对基因工程而设计的一道题目，考查了学生对PCR过程实质的理解、对基因工程操作程序的掌握以及DNA稳定性的理解。当然因为没有看到评分标准不敢妄言，有些空的参考答案可能比较灵活而不一定非要拘泥于某种格式。

第一小题考PCR需要DNA作为模板，所以以mRNA为起点的话需要利用逆转录先获得cDNA，后者才能作为PCR的直接模板。

第二小题考查基因工程中构建重组DNA分子（质粒）的方法：限制性核酸内切酶处理形成相应的粘性末端，然后利用DNA连接酶链接相应的粘性末端。从中可以得出先要限制性核酸内切酶处理，才可以进行进一步的操作，所以需要有限制性核酸内切酶的识别位点。

“为了避免引物自连”这句话该如何解读，是PCR之后还是之前呢？如果PCR之前不同引物就靠碱基互补配对而形成（部分）双链的话会造成引物不能同模板DNA结合，也就不能发生进一步的链式反应，这一点需要避免；在PCR之后已经没有所谓的引物了，它们都变成了DNA序列的一部分，如果说互连也只是相关DNA片段的互连而不能描述为引物自连。所以这个空应该是“不同引物间形成氢键”或者“不同引物间形成（部分）双链”或者“靠碱基互补配对”。

第三小题很简单，PCR的第一步是加热高温DNA变性，也就是DNA的解旋。因为有高温破坏氢键所以无须解旋酶的参与，降低了细胞外酶促反应体系的复杂性，有利于反应精确性和产物唯一性的提高。

第四小题退火的目的是让引物与DNA模板靠碱基互补配对而形成部分双链，温度过高会使形成的部分双链不稳定，即“破坏引物与模板间的碱基对”；而因为CG间的三个碱基比AT之间多，所以在相对较高的温度下含CG数目较多时更容易成功，退火温度低会增加产物的不确定性。

第五小题的 “②降低退火温度”是对的，若退火温度过高，则引物与模板DNA无法形成部分双链，PCR也就不能发生，而退火温度过低只会使产物的复杂性提高、准确性降低，而不会得不到任何产物；“③重新设计引物”前提是人们对操作的基因多少有所了解，引物不合适会使PCR不能发生或产物不完整。