癸甲溴铵戊二醛消毒剂杀菌效果的试验

为了防止畜禽疫病不断发生，消毒工作是预防和控制的重要环节之一，是切断病原微生物传播的重要手段。随着人们对消毒重要性认识的逐步提高，实际工作中消毒药物的使用越来越广泛。而消毒效果与选用的消毒剂有很大的关系。近年来，国内外均致力于寻求高效、快速、广谱的消毒剂。其消毒效果往往受到微生物的种类、pH、温度、浓度、有机物等因素的影响。为了解癸甲溴铵戊二醛的消毒效果，选用了金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏杆菌、溶血性链球菌C群进行定性杀灭试验、载体定量杀菌试验和现场消毒效果的观察，为评价该消毒剂对细菌杀灭效果提供依据。

1 材料

1.1 受试菌种 金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏杆菌、溶血性链球菌C群。

1．2 试剂 10 g／L蛋白胨的磷酸盐缓冲液、普通营养琼脂培养基小牛血清、马丁肉汤培养基均由本课题组提供。

1．3 脱脂白平纹布片(10 mm×10 mm)、PQ一240型喷雾消毒机，均由本课题组提供。

1．4 试验用猪舍 由山西省农业科学院畜牧兽医研究所猪场提供。

1．5 消毒剂和中和剂 癸甲溴铵戊二醛消毒剂，(由山西神龙药业有限公司提供)；甘氨酸和吐温一80从市场购买。

2 方法

2．1 菌液制备将细菌传至第6～8代，用PBS稀释成4×10。CUF／ml 细菌悬液。

2．2 癸甲溴铵戊二醛消毒剂用灭菌蒸馏水稀释成不同浓度，每管2．5 mL分别加人等量受试菌液，混匀，置于20C水浴中，每隔5、10、15、30 min和60min，从每管中取0．5 mL加人到含中和剂的4．5 mL马丁肉汤中摇匀，中和10 min之后，再取出0．5 mL加到4．5 mL马丁肉汤培养基内，置37℃培养24 h，观察细菌生长情况，混浊表示细菌生长，不变混浊继续培养至第7天，仍不混浊可判为无菌生长。同时设对照管。

2．3 载体定量杀菌试验将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，分别用含10 g／L蛋白胨的磷酸盐缓冲液(PBS)制成菌悬液。取菌悬液0．02 mL，滴染于脱脂白平纹布片(10 mm×10mm)上。置37℃培养箱内干燥20 min，制成菌片。试验时，将1片菌片加人5．0 mL消毒液(阳性对照为PBS)中。作用至规定时间，取出菌片，移人50 mL中和剂溶液的试管中，中和作用10 min，敲打试管以洗脱菌片上菌并混匀。取洗脱液0．5 mL作普通营养琼脂倾注接种，置37。C培养48 h，观察结果。计算杀灭率。

2．4 观察有机物影响时，向菌悬液中加人小牛血清后再染制菌片，按上述程序进行试验。

2．5 猪场猪舍消毒试验选用青年猪舍进行，猪舍结构为金属笼架饲养，水泥地面。经过清扫及自来水冲洗，待干燥后，用PQ一240型喷雾消毒机，按每m 空间250 ml消毒剂喷洒，癸甲溴铵戊二醛消毒剂用自来水(不含其他消毒剂)配制成1%浓度，喷洒后关闭门窗1 h。消毒前与消毒后，分别用棉拭子对猪舍地面和饲槽外壁进行5点涂擦采样。棉拭子用中和剂(甘氨酸和吐温一80水溶液)浸湿。在采样地点5 cm×5 cm规格面积内均匀擦拭2～4次，边擦边转动棉拭子，将拭子放人中和剂液内，用力振动50～100次，洗液在鲜血营养琼脂平板上培养，进行活细菌汁数，随后计算杀灭率。

2．6 观察项目 细菌在马丁肉汤培养基巾的生长情况，培养基变浑浊为阳性、不变浑浊为阴性。消毒前后细菌在琼脂培养基上生长菌落数的变化。

3 结果

3．1 中和剂效果 以金黄色葡萄球菌为指示细菌，结果表明：以50 g／l 甘氨酸和吐温一80的缓冲液作为中和剂能有效地中和10 消毒剂溶液，且并不影响细菌的生长。

3．2 杀菌效果 3种细菌分别与不同浓度的消毒剂作用不同时间，以无菌生长管的消毒剂最低浓度为最低杀菌有效浓度，以无菌生长管的最短消毒时间为该浓度杀菌最快有效时间。

癸甲溴铵戊二醛消毒剂1：700稀释时，5 min能有效杀灭金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏杆菌、溶血性链球菌。

金黄色葡萄球菌消毒作用5 min、大肠埃希氏杆菌消毒作用1 min杀灭率达99．00%以上。

3．3 有机物影响试验结果表明，当菌悬液含体积分数25％和50 小牛血清作用7 min时，癸甲溴铵消毒剂对金黄色葡萄球菌杀灭效果有轻度影响。

3．4 猪场猪舍消毒效果 癸甲溴铵戊二醛消毒剂对猪场的消毒效果中可看出：猪舍消毒前细菌平均数为207 624，消毒后细菌平均数为91，细菌平均杀灭率为99．96%。因此，癸甲溴铵戊二醛消毒剂现场使用1%浓度60min可杀灭鸡舍99．96%的细菌。

4 小结与讨论

4．1 癸甲溴铵戊二醛破坏细菌表面的蛋白受体。在实验室的条件下，即使作1：700倍稀释，在10min内，能有效地杀灭金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏杆菌、溶血性链球菌；既能杀灭革兰氏阳性菌、又能杀灭革兰氏阴性菌，现场使用1%浓度，在60 min内可杀灭99．96％细菌。因此，在实际应用过程中，使用1 浓度就可以达到理想的消毒效果。

4．2 实验室条件下研究消毒剂的消毒效果时，当混合液移到培养基中时，不可避免地带有少量残余消毒剂，能继续阻碍细菌在培养基中的生长繁殖，形成阴性结果，所以，在测定杀菌浓度试验时，必须除去残余的消毒剂的影响。本研究中，选用的中和剂能很好地中和消毒剂，且其浓度并不影响细菌的生长。

4．3 消毒剂消毒效果的评价方法有实验室试验方法和现场消毒效果检测两种，实验室试验方法有直观、重复性好等优点，不仅可以用来测定消毒剂的杀菌、杀病毒、杀芽孢的作用等，而且还可以用于两种或两种以上消毒作用的比较。本试验之前，选择了适合各类细菌生长的培养基、稀释液、中和剂。所选择的消毒剂的试验浓度、消毒剂的中和浓度以及消毒剂一菌液混合作用时间对各试验菌株都比较敏感。因此，试验方法比较可靠，结果具有一定的可信度。现场消毒效果检测试验，利用琼脂平板倾注计数法，计算猪舍消毒前后的细菌总数，能够比较真实地反映消毒前后猪舍细菌的状态，说明消毒的效果，为实际应用提供依据。