SMCC,LC-SMCC,Sulfo-SMCC偶联抗体过程(64987-85-5)

标签:
双功能交联剂smccsulfo-smcclc-smcc |
分类: 交联剂 |
SMCC:
SMCC crosslinker(4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸-N-琥珀酰亚胺酯)是一种具有马来酰亚胺基团的异官能团蛋白质交联剂,即巯基(巯基;-SH)反应和NHS酯基团,胺反应性。SMCC的9原子间隔臂是不可裂解的。
产品名称 |
SMCC (N-Succinimidyl 4-(N-Maleimidomethyl)cyclohexanecarboxylate)
|
化学品名 |
4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸-N-琥珀酰亚胺酯 |
外观 |
White powder |
CAS |
64987-85-5 |
分子量 |
334 |
溶解度 |
DMF或DMSO |
货号 |
R-S-0010 |
规格 |
100mg |
储存 |
-20度 |
SMCC的特点:
•反应性基团:NHS酯和马来酰亚胺
•反应朝向:氨基和巯基
• 不可劈开
• 不溶于水(溶解在DMF或DMSO中)
• 高纯度结晶试剂可用于制备高纯度马来酰亚胺活化衍生物
• 环己烷桥赋予马来酰亚胺基团的稳定性,使SMCC成为马来酰亚胺活化蛋白质的理想交联剂。马来酰亚胺基团在0.1 M磷酸钠缓冲液中稳定64小时,在4时pH值为7。
抗体与SMCC的结合
http://s13/mw690/003ap78czy7jXKy8cHO2c&690
这种共轭方法能够制备马来酰亚胺活化蛋白(步骤1),其可以稳定地储存以与含巯基的蛋白质进行后期结合(步骤2)。取决于胺和巯基在各自蛋白质上的可用性,该方法可用于任一方向(例如酶抗体或酶抗体)。SMCC的一个非常流行的应用是激活免疫原性载体蛋白以结合半胱氨酸末端肽用于抗体生产。
Sulfo-SMCC
Sulfo-SMCC是水溶性的氨基-巯基交联剂,在中等长度的环己烷间隔臂(8.3埃)两端分别包含了NHS酯和马来酰亚氨基反应基团。
产品名称 |
Sulfo-SMCC
|
化学品名 |
3-(2-Pyridyldithio)propionicacid N-hydroxysuccinimide ester |
外观 |
白色粉末 |
CAS |
92921-24-9 |
分子量 |
436 |
溶解度 |
water |
货号 |
R-S-0011 |
规格 |
100mg |
储存 |
-20度 |
结构式 |
|
Sulfo-SMCC的特性:
•
•
•
(相比SMCC)具有水溶性,可以在生理溶液中实现交联
•
高纯度晶体试剂可用于生成高纯度马来酰亚胺激活衍生物
•
环己烷桥为马来酰亚胺基团赋予了额外的稳定性,这使得Sulfo-SMCC成为马来酰亚胺激活蛋白的理想交联试剂。4°C、pH7的条件下,马来酰亚胺基团在0.1 M磷酸钠缓冲液中可稳定保存64小时。
Sulfo-SMCC是不能切割,不具膜通透性的交联剂,包含一个胺反应性的-羟基琥珀酰亚胺(NHS酯)和一个巯基反应性马来酰亚胺基团。NHS酯能够在pH7-9的条件下与伯胺基发生反应,形成稳定的酰胺键。马来酰亚胺能够在pH6.5-7.5的条件下与巯基发生反应,形成稳定的硫醚键。由于间隔臂中含有环己烷桥,Sulfo-SMCC和SMCC的马来酰亚胺基团甚至在pH7.5条件下都具有极好的稳定性。由于含有疏水的磺酰基团,Sulfo-SMCC在水及许多常规缓冲液中的溶解度能达到10mM左右,这就避免了有机溶剂可能对蛋白结构造成的损害。
SMCC及其水溶性Sulfo-SMCC是含有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯和马来酰亚胺基团的异官能团交联剂,其允许胺和巯基的共价结合。NHS酯在pH 7-9与伯胺反应形成酰胺键,而马来酰亚胺在pH6.5-7.5处与巯基反应形成稳定的硫醚键。在水溶液中,NHS酯水解降解是一种竞争反应,其速率随pH的增加而增加。马来酰亚胺基团比NHS酯基团更稳定,但在pH值>7.5时会缓慢水解并失去其对巯基的反应专一性。由于这些原因,与这些交联剂的结合通常在pH 7.2-7.5下进行,NHS酯(胺靶向)在马来酰亚胺(巯基靶)反应之前或同时反应。
这些试剂的间隔臂中的环己烷环与不含该环的类似试剂相比,降低了马来酰亚胺基团的水解速率。此特征使得能够用SMCC或磺基SMCC活化的马来酰亚胺的蛋白质冻干并储存用于共轭到巯基分子。许多马来酰亚胺激活蛋白产物以这种方式产生(见相关的热科学产品)。
Sulfo-SMCC应用:
•
抗体的酶标记 -
同时保留酶与抗体的特异性
•
通过一步或两步交联反应生成特异生物偶联物
•
生成巯基反应性、马来酰亚胺激活的载体蛋白,用于结合半抗原
Sulfo-SMCC将抗体附着在玻璃、石英或石英表面
两步反应方案
图3。用Sulfo-SMCC偶联抗体和酶蛋白的两步反应方案在这个例子中,交联剂首先与抗体反应以产生马来酰亚胺激活蛋白。除去过量的未反应的交联剂和副产物后,马来酰亚胺活化的抗体与具有巯基的酶的适当摩尔比反应。通常,每抗体分子发生几个或多个马来酰亚胺激活,使多个酶分子与每个抗体分子结合。
SMCC和Sulfo-SMCC对湿气敏感。在干燥剂中储存试剂瓶。在打开前平衡小瓶至室温,以避免容器内的湿气凝结。溶解所需量的试剂,并在水解发生前立即使用。丢弃任何未使用的重组试剂。不要在溶液中储存试剂。
•无称重微管处理:使用前,用吸管尖穿刺微管箔,加入200μl的50mm磷酸钠缓冲液(pH 7.0~7.5)或超纯水和吸液管上下混合。使用后,从微管条上切下所用的微管,并弃去。将未使用的微管储存在提供的箔袋中。
注意:不要使用磷酸盐缓冲盐水(PBS)来初始溶解磺基SMCC;试剂不能很好地溶解在超过50mm总盐的缓冲液中。然而,一旦溶解,溶液可以在PBS或其它非胺缓冲液中进一步稀释。
•避免在共轭过程中含有初级胺(例如TrI或甘氨酸)和巯基的缓冲液,因为它们会与预期的反应竞争。如果需要,将样品透析或脱盐成适当的缓冲液,如磷酸盐缓冲盐水(PBS)。
• Molecules to be reacted with the maleimide moiety must have free (reduced) sulfhydryls. Reduce peptide disulfide bonds with Thermo Scientific Immobilized TCEP Disulfide Reducing Gel (Product No. 77712). For proteins, reduce disulfide bonds using 5mM TCEP (1:100 dilution of Thermo Scientific Bond-Breaker TCEP Solution, Product No. 77720) for 30 minutes at room temperature, followed by two passes through a suitable desalting column (e.g., Thermo Scientific Zeba Spin Desalting Columns). Be aware that proteins (e.g., antibodies) may be inactivated by complete reduction of their disulfide bonds. Selective reduction of hinge-region disulfide bonds in IgG can be accomplished with 2- Mercaptoethylamine•HCl (2-MEA, Product No. 20408). Sulfhydryls can be added to molecules using N-succinimidyl Sacetylthioacetate (SATA, Product No. 26102) or 2-iminothiolane•HCl (Traut’s Reagent, Product No. 26101), which modify primary amines.
产品列表:
Sulfo-NHS,N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐,CAS #: 106627-54-7
Biotin-ONP,(+)-生物素-4-硝基苯酯,CAS#: 33755-53-2
Biotin-PFP,五氟苯酚生物素酯/生物素五氟苯酯,CAS#:120550-35-8
6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯,CAS#:55750-63-5
6-Maleimidohexanoic acid,CAS#:55750-53-3
N-Maleoyl-β-alanine(MPA),CAS#:7423-55-4
4-Maleimidobutyric acid(MBA),CAS#:57078-98-5
11-马来酰亚胺十一烷酸 N-琥珀酰亚胺酯,CAS#:8nth="4" day="2" islunardate="False" isrocdate="False" w:st="on">7981-04-2
2-马来酰亚胺基乙酸,CAS#:2nth="8" day="3" islunardate="False" isrocdate="False" w:st="on">5021-08-3
11-Maleimidoundecanoic acid(KMUA)CAS#:5nth="1" day="3" islunardate="False" isrocdate="False" w:st="on">7079-01-3
Sulfo-EMCS, ε-马来酰亚胺己酸磺基琥珀酰亚胺酯
AMAS, CAS#:55750-61-3
1,2-Bis(maleimido)ethane, CAS#:5132-30-9
Boc-6-Ahx-OSu, CAS#:51513-80-5
N-Boc-2,2-(ethylenedioxy)diethylamine ,CAS#:153086-78-3
N,N,N,N-Tetramethyl-p-phenylenediamine, CAS#:100-22-1
N-Succinimidyl 6-Biotinamidohexanoate, CAS#:72040-63-2
N-(+)-Biotinyl-6-aminohexanoic
acid
CAS#:127062-22-0
DTSSP
BS3
BS2G
BSG
DSP
DSS
DTSSP
EGS
Sulfo-EGS
DSSeb
BMPS
EMCS
GMBS
LC-SPDP
MBS
PDPH
SBA
SIA
SMCC
SMPB
SMPH
SPDP
Sulfo-LC-SPDP
Sulfo-MBS
Sulfo-SANPAH
Sulfo-SMCC
Biotin Hydrazide
NHS-Biotin
NHS-SS-Biotin
Sulfo-NHS-Biotin
HPG
SATA
Sulfo-NHS Acetate
Biotin-maleimide
Biotin ethylenediamine
hydrobromide
Biotinamidohexanoic acid
hydrazide
CAS#: 89889-52-1
TSAT
BMPH
EMCH
KMUH
BMOE
BMB
BMH (bismaleimidohexane)
TMEA
DTME
SATP
EMCA
AEDP
LC-SMCC
LC-SMCC是在长环己烷稳定间隔臂(16.2埃)的相对端含有NHS酯和马来酰亚胺反应基团的胺到巯基交联剂。
产品名称 |
LC-SMCC |
外观 |
白色粉末 |
CAS |
125559-00-4 |
分子量 |
447 |
溶解度 |
DMSO or DMF |
货号 |
R-S-0027 |
规格 |
100mg
|
储存 |
2-8 |
LC-SMCC的特点:
•
•
•
• 高纯度结晶试剂可用于制备高纯度马来酰亚胺活化衍生物
• 不可劈开
• 不溶于水(溶解在DMF或DMSO中)
• 环己烷桥赋予马来酰亚胺基团的稳定性,使LC-SMCC成为马来酰亚胺活化蛋白质的理想交联剂。马来酰亚胺基团在0.1 M磷酸钠缓冲液中稳定64小时,在4时pH值为7。
LC-SMCC是一种不可裂解的膜渗透交联剂。它含有胺反应性N-羟基琥珀酰亚胺(NHS酯)和巯基反应马来酰亚胺基团。NHS酯与伯胺在pH 7-9发生反应,形成稳定的酰胺键。马来酰亚胺与pH6.5-7.5的巯基反应形成稳定的硫醚键。LC-SMCC的马来酰亚胺基团,由于间隔臂中的环己烷桥而异常稳定至pH 7.5。
应用:
1.
2.
3.
4.
5.
产品列表:
BDP 558/568 NHS ester
BDP 581/591 NHS ester
BDP 630/650 X NHS ester
BDP FL NHS ester
BDP R6G NHS ester
BDP TMR NHS ester
BDP TR NHS ester
BDP 581/591 azide
BDP 630/650 azide
BDP FL azide
BDP R6G azide
BDP TMR azide
BDP TR azide
BDP 558/568 alkyne
BDP 581/591 alkyne
BDP 630/650 alkyne
BDP FL alkyne
BDP R6G alkyne
BDP TMR alkyne
BDP TR alkyne
BDP 581/591 maleimide
BDP 630/650 maleimide
BDP FL maleimide
BDP R6G maleimide
BDP TMR maleimide
BDP TR maleimide
BDP 581/591 hydrazide
BDP 630/650 hydrazide
BDP FL hydrazide
BDP TR hydrazide
BDP 558/568 carboxylic acid
BDP 581/591 carboxylic acid
BDP 630/650 carboxylic acid
BDP FL carboxylic acid
BDP R6G carboxylic acid
BDP TMR carboxylic acid
BDP TR carboxylic acid
BDP 581/591 amine
BDP 630/650 amine
BDP FL amine
BDP R6G amine
BDP TMR amine
BDP TR amine
BDP 581/591 tetrazine
BDP 630/650 tetrazine
BDP FL tetrazine
BDP TR tetrazine
以下染料的激发波长是685nm 发射波长是720nm
Azo-Bodipy-685
Azo-Bodipy 685 carboxylic acid
Sulfo-Azo-Bodipy 685 carboxylic acid
Azo-Bodipy 685 NHS ester
Sulfo-Azo-Bodipy 685 NHS ester
Azo-Bodipy 685 amine
Sulfo-Azo-Bodipy 685 amine
PEG-Azo-Bodipy 685 NHS ester
PEG- Azo-Bodipy 685 amine
Azo-Bodipy 685 alkyne
Sulfo-Azo-Bodipy 685 alkyne
Azo-Bodipy 685 azide
Sulfo-Azo-Bodipy 685 azide
Azo-Bodipy 685 maleimide
Sulfo-Azo-Bodipy 685 maleimide
Azo-Bodipy 685 pH6.5
我们还接受激发波长和发射波长在500nm-800nm之间的BDP活性荧光染料的定制产品。
上面所述染料可以连接:COOH,
以上资料源于西安瑞禧生物科技有限公司