分子克隆载体如何选择?
(2014-04-30 14:26:46)
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克隆载体载体全式金peasy基因休闲 |
分类: 生物实验相关 |
选择克隆载体的几个重要参数:
1、实验对象
2、实验性质
3、载体容量
4、 合适克隆位点
5、载体的稳定性
6、克隆载体的特点
实验对象:
1、供体:遗传背景与DNA特点等,其中包括染色体DNA大小,基因大小与结构,碱基组成,目的基因的产物特点以及遗传物质的传递方式等。
2、受体:各种中间宿主与终宿主的遗传背景,如遗传物质的传递方式(包括认为的方法),DNA限制修饰系统,DNA重组基因特点,基因产物修饰系统,即转录与翻译后修饰系统。
实验性质:
分子克隆的一般程序包括以下几步:
1、分离供体DNA或RNA(mRNA)和载体DNA
2、构建基因文库或cDNA文库
3、目的基因或cDNA克隆的筛选
4、目的基因或cDNA片段的鉴定:限制酶谱,次克隆,核苷酸序列分析,基因结构分析等
5、基因表达与调控机理的研究
克隆载体容量:
M13mp载体
细菌质粒载体
λ载体
cos质粒载体
P1载体
pEASY载体
合适的克隆位点:
单克隆位点和多克隆位点;单克隆位点的克隆载体就能够很方便的在基因上设计酶切位点,如pEASY-T1 Simple Cloning Kit克隆载体,双抗,无多克隆酶切位点;而多克隆位点的克隆载体中,酶切位点多,相对于实验来说也更容易。如pEASY-T1 Cloning Kit克隆载体,双抗性,酶切位点多。
克隆载体的稳定性:
克隆载体的稳定性决定着实验的成败,如果克隆载体在基因克隆过程中足够的稳定,而且能够多次的重复利用,那么此克隆载体的稳定性很好。如pEASY-T5 Zero Cloning Kit克隆载体的研发数据显示10kb目的基因可以稳定的连接。
克隆载体的特点: