一、样品量要求：

1*10 7 cell/sample，提供 2 份样本。

二、样本收集步骤：

1） 使用细胞计数器测定细胞数量，计算出所需淬灭缓冲液的量。下图以细胞数量

1*10 7 为例；

NOTE：  ①使用50ml圆锥形管一次处理样本最大量为8ml，如果样本量>8ml，就分开做；②淬灭过程时间敏感，最好两个人操作。

2） 将 5 倍样本体积的淬灭缓冲液加入 50ml 圆锥形管中；

3） 在低温恒温器上预冷淬灭缓冲液至-40℃ （淬灭缓冲液：60%（v/v）甲醇+0.85%（wt/v）碳酸氢铵（pH7.4，使用 12M 的盐酸进行 pH 调节）。如果没有低温恒温器，可以使用干冰代替，并用低温温度计检测温度，保证每管都处于-40℃，温度不能过低）；

NOTE： 由于单人操作，最多 2 样本/次，双人操作，4 样/次。保证淬灭处理迅速。因为时间要求“迅速”。

4） 吸取 1 体积的细胞样本（1*10 7 ），加入到盛有淬灭缓冲液的管中央。

NOTE： 温度必须维持在-40℃左右，低于 45℃时，会导致细胞破碎。

5） 缓慢摇晃管子，混匀。

NOTE： 禁止 Vortex 涡旋震荡混匀！

6） 1000g 离心 1min；

7） 去除上清。NOTE：当上清被去除干净后，继续贴壁吸取 5s 以保证上清完全被去除，因为有些上清粘在壁上，回落的话，会对后继操作带来负面影响。

8） 使用 200μl -80℃的甲醇将细胞重悬，并转移到 1.5ml 的离心管中，然后用

液氮冰冻；

9） -80 度冻存。足量干冰寄送。

三、注意事项：

1）淬灭缓冲液 pH 值要在每次适用前重新测定调整。

2）温度要控制好，强烈建议使用-40℃冰柜操作。

四、参考文献：

Sellick C A, Hansen R, Stephens G M, et al. Metabolite extraction from

suspension-cultured mammalian cells for global metabolite profiling.[J].

Nature Protocol, 2011, 6(8):1241-9.