基因的产物——蛋白质，反应了生命活动正在发生的事情。蛋白质组成及含量变化的研究愈演愈烈。在蛋白质组学研究中，一方面，WB、ELISA这些依赖于抗体的检测方法，对抗体质量要求极高。另一方面，基因水平的表达与蛋白含量的变化相关性较差。这些传统的方法都给蛋白含量的分析带来了困难。在这个大时代背景之下，MRM^HR /PRM堪称“质谱界的WB、定量金标准 、U盘中的‘数字化抗体’”便应运而生。

MRM^HR/PRM简介

PRM（平行反应监测, Parallel Reaction Monitoring），靶向蛋白质组，是一种基于高分辨、高精度质谱的靶向定量技术，能够对目标蛋白质/肽段（以及含有修饰的肽段）进行选择性检测，从而实现对目标蛋白质/肽段的精准定量。借用听来的一个比喻来说，靶向蛋白质组扫描就像精准狙击，排除干扰，目标明确，每一枪直指目标。

其基本原理是：四级杆（Q）首先选出的目标肽段离子，进入碰撞室中打碎后，所有的碎片离子经过质量分析器产生一张高分辨的二级质谱图，通过提取其中的碎片离子信息即可实现目标肽段的定量。

MRM^HR/PRM  VS  WB

技术特点

（1）灵敏度、重现性和准确度高，定量范围可达到5个数量级，定量重现性CV<10%, 相对误差<15%。

（2）与经典的Westernblot、ELISA 技术相比，不需要使用抗体，获得更为准确和重现的定量验证结果。

（3）在一个小时检测时间内可同时实现50个蛋白质的定量检测。

（4）MRM^HR/PRM可直接检测二级所有离子，减少了子离子的挑选和优化过程。

应用范围

目标蛋白质/肽段相对或绝对定量，蛋白质翻译后修饰的定性定量研究。

（1）定量蛋白质组学（iTRAQ、label-free、SILAC）后，目标蛋白需验证

（2）要做WB，却苦于没有抗体

（3）有多个蛋白质需同时定量

（4）功能研究中涉及到蛋白质定量

在应用时，一方面，使蛋白质验证不再受制于商业化抗体，可以应用于多种非模式生物。另一方面，使抗体验证能够高通量的在大规模生物样本上进行，提高实验效率。

技术特点

（1）灵敏度、重现性和准确度高，定量范围可达到5个数量级，定量重现性CV<10%, 相对误差<15%。

（2）与经典的Westernblot、ELISA 技术相比，不需要使用抗体，获得更为准确和重现的定量验证结果。

（3）在一个小时检测时间内可同时实现50个蛋白质的定量检测。

（4）MRM^HR/PRM可直接检测二级所有离子，减少了子离子的挑选和优化过程。

应用范围

目标蛋白质/肽段相对或绝对定量，蛋白质翻译后修饰的定性定量研究。

（1）定量蛋白质组学（iTRAQ、label-free、SILAC）后，目标蛋白需验证

（2）要做WB，却苦于没有抗体

（3）有多个蛋白质需同时定量

（4）功能研究中涉及到蛋白质定量

在应用时，一方面，使蛋白质验证不再受制于商业化抗体，可以应用于多种非模式生物。另一方面，使抗体验证能够高通量的在大规模生物样本上进行，提高实验效率。

Reference:

Phosphoproteins in extracellular vesicles as candidate markers for breast cancer. Proc Natl Acad Sci

 U S A 2017, 114(12): 3175-3180