将制备好的siRNA和其表达载体转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、 DEAE- 葡聚糖和 polybrene 、机械法（显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。

一、转染方法

哺乳动物转染的常见方法有：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、 DEAE- 葡聚糖和 polybrene 、机械法（例如 ， 显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。

二、脂质体型转染

(一) 注意事项

1. 转染试剂的用量
2. siRNA（小干扰RNA）的用量
3. 转染时的细胞密度
4. 转染时的操作顺序
5. 细胞与转染试剂 /siRNA（小干扰RNA）复合物的温浴的时间

(二) SiMi 转染试剂

选择最适合的转染试剂和转染条件，往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子. SiMi Transfection Reagents 适用于核酸的体内和体外操作，可应用于 DNA 、 RNA 、反义寡核苷酸、 siRNA（小干扰RNA）的转染，也可应用于DNA/siRNA（小干扰RNA）的共转染操作；是一种新型的高效 siRNA 转染试剂。

(三) SiMi 应用领域

1. 原代培养细胞和转化细胞株的基因转染
2. siRNA（小干扰RNA）高通量转染试验
3. DNA 转染； DNA 和siRNA（小干扰RNA）的共转染
4. 核酸（ siRNA 、 DNA 、 RNA ）的体内导入试验
5. 贴壁细胞和悬浮细胞转染

(四) SiMi 特点

1. 不必更换培养基，操作简便易行，可在半小时内完成操作
2. 在含血清培养基中也能表现高转染效率
3. 细胞毒性低；适用细胞广泛
4. 即用型试剂，可在含有抗生素的完全培养基中转染
5. 基于脂质的转染试剂，确保没有 RNAse 活性
6. 可介导siRNA（小干扰RNA）高转染细胞及体内 siRNA（小干扰RNA）的高效导入

三、 适用细胞类型

SiMi Transfection Reagents 转染试剂可广泛应用于多种细胞系的 DNA 和siRNA（小干扰RNA）转染如： HeLa( 人颈部癌细胞 ) 、 MCF-7( 人乳房癌细胞 ) 、 Hep3B( 人肝细胞癌细胞 ) 、 COS-7( 猴肾细胞 ) 、 Neuro-2a( 鼠神经母细胞瘤细胞 ) 、 NIKS( 人角质化细胞 ) 、 B16( 鼠黑素瘤细胞 ) 、 DLD-1( 人结肠癌细胞 ) 、 NIH/3T3( 鼠胚胎成纤维细胞 ) 、 HT-29( 人结肠腺癌细胞 ) 、 A549( 人肺癌细胞 ) 、 CHO-k1( 仓鼠卵巢细胞 ) 和 293( 腺病毒 5 DNA 转化的人胚胎肾细胞 )，SVRbag4 细胞等。

四、转染前细胞培养

在细胞板上培养细胞时，应使细胞汇合在 24 小时内达到 70-90%。

细胞培养用品	表面积（mm2/ 孔）	细胞密度	培养基（μl /孔）
96 孔板	50	1.5 * 104-5.0 * 104	100 μl
48 孔板	100	3.0 * 104-1.0 * 105	200 μl
24 孔板	200	8.0 * 104-2.0 * 105	500 μl
12 孔板	401	1.6 * 105-4.0 * 105	1.0 mL
6 孔板	962	3.0 * 105-8.0 * 105	2.0 mL
35 mm	962	3.0 * 105-8.0 * 105	2.0 mL
60 mm	2827	1.0 * 106-2.5 * 106	6.0 mL

合适的 SiMi Transfection Reagents 用量

合适的 siRNA（小干扰RNA）(DNA) ： lipofetamin2000 比例对核酸的高效转染有重要影响；我们推荐的 DNA ： lipofetamin2000 为 1 ： 0.5 — 1 ： 5 （ ug:ul ）， siRNA（小干扰RNA）： SiMi Transfection Reagents 为 1 ： 0.01-1 ： 0.1 （ pmol ： ul ）一般情况下，此范围内都可获得高的转染效率。