加载中…流式细胞直接标记和间接标记法
(2013-10-09 22:36:10)
标签：
流式细胞直接间接 |
分类： 流式细胞检测服务文献 |
流式直接免疫荧光标记法 ：
取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。
流式间接免疫荧光标记法 ：
取一定量的细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆">克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。
样本送检注意事项：
1）单个细胞：1~2×106
个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2） 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
3）
用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约，同时说明实验目的、方法等。一次送检标本数不少于10个。如果一次送检标本总数不足10个，每个测试费用为标准收费×2。
4） 当天上机即可出实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。
5）
实验使用标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，也可委拖本实验室代购；用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。
6） 由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。
7） 请客户说明检测具体要求，由于填写资料不详所致任何问题由客户负责。
8） 请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息，样品检测后原则上本公司不负责保存。
喜欢
0
赠金笔