免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术.

免疫组化具有操作简单，特异性强，敏感性高，定位准确，形态与功能相结合等特点。

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免疫组化常见问题分析：

1.显色过深：一抗浓度过高或孵育时间过长，建议降低一抗浓度或建少孵育时间；孵育温度过高，建议室温4度；HRP标记二抗孵育时间过长，建议减少时间

2.非特异性显色：石蜡切片脱腊不彻底，建议延长脱腊时间。

操作过程中冲洗不冲充分，建议增加冲洗的次数与冲洗的时间。

发生抗原异味。

蛋白封闭不充分，建议增加蛋白封闭时间。

3.显色强度弱：一抗浓度过低或孵育时间过短；操作过程中冲洗过度，建议适度冲洗。

   免疫荧光又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位
  该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。

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免疫荧光常见问题分析：

1.背景过高：一抗或二抗浓度太高；封闭不完全，建议增加蛋白封闭时间；可通过调节荧光显微镜的参数降低背景；

2.信号弱无信号：无目的蛋白或表达量极少；细胞通透性差；一抗二抗浓度太低。

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流式特点：1.测量速度快；2.可进行多参数测量；3.是一门综合性的高科技方法（ FCM综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术）；4.既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。