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做western blot中loading buffer作用

(2013-08-06 14:33:26)
标签:

westernblot

技术

实验

蛋白

分类: Westernblot
做western blot中loading buffer作用,即跑SDS-PAGE时在蛋白样中加入loading buffer的作用:
1、指示剂,方便观察电泳进行的程度;
2、密度大,携带你的样本沉到孔的底部;
3、保持蛋白线性及携带过量负电荷的状态。
除此之外,里面最重要的是还有巯基乙醇还原剂来让蛋白质充分变性,同时保护-SH基团。
在western blot中loading buffer的主要成分是:
loading buffer的主要成分是SDS,甘油,溴酚蓝,TRIS,其中甘油的作用是使样品沉到点样孔中而不漂浮起来,SDS是结合蛋白质,使所有蛋白质所带电荷性质一样,但不同分子量的蛋白结合的SDS数量是不一样的。溴酚蓝是指示剂,可以用来观察大概的电泳过程,因为它在不同浓度的胶中泳动的速率不一样,从而也可以看做是一个蛋白样品,这样就可以直观的大概了解蛋白泳动到了哪个位置,但是只能看一个大概。
 

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