很多同学在做RT-PCR，PCR时电泳跑不出条带，其主要原因在于引物没有设计好。如需PCR技术服务者请与我们联系，不会设计引物的同学请由我们代你设计，以免耽误你们实验进程。如需学习的同学，请提前和我们预约好，我们技术在实验过程中会详细讲解与你们。

  以下是网上搜集的一些经验，还是比较管用的，大家可以借签下：

  开始实验时,先想想有没有犯错误,比如3'端引物设反了(5'和3'倒置),目的片段是不是过长等,可以给同学检查一下~~.或者添加检查原因,阳性对照(很重要!),对照一定要详尽,包括模板的对照(用质量好的cDNA扩actin等),基因的对照(找到一对可靠的基因组引物去用你的模板扩增基因组序列),也可以再合成一对新引物试试.

  再次,我们可以对积累到的一点点战果进行保存.比如你某次PCR发现在预测的位置有条很暗的条带,可以将其切下来,回收一下,下次利用其作为模板扩一扩(很简单,就是回收一个样品,下次扩的时候算是带上一个样品就可以了),失败了则扔掉.

  最后,一定要保证清醒的头脑,不要打疲劳战,不要死磕,不成功就歇歇.个人认为你的原因不是在模板浓度上,模板浓度对PCR的影响还是很小的,通常的时候模板依经验值没有问题.如果你觉得有问题,可以测OD.(测DNA浓度很简单,10分钟轻松搞定.主要是要一台专门测DNA,RNA及蛋白的小型分光光度计,普通的分光光度计测起来不方便。