流式测细胞周期前，如何固定细胞？实验室做流式的时间固定一周的两天，所以细胞只好收集起来固定几天后再做，那么一般用什么方法来固定时间了？以下是我为大家收集的几个处理方法：

一、用冰乙醇固定的问题：
1，PBS洗涤2次。
2，离心时采取800～1000rpm 5min（我不知道离心力是多少）。我们没有要求4度离心。（效果一样。）
3，细胞数的要求不是很严，我们可以这样估计一下：流式最终上机需要至少6000～10000个细胞，调试仪器如果需要20000个的话（做周期很好调的）一共是30000个细胞。做染色要PBS洗2次，pc buffer后洗一次，共3次，按每次损失20％（实际上没有这么多，只要操作小心，我们实验室的高手做Annexin V据说只用1w个细胞就可以开始做！！！其实也就是少丢弃细胞的意思）计算，需要不超过5w个，固定时洗涤两次，最多不超过8w个细胞，也就是说，1*10-6个细胞足以！！实际上操作也是这样，细胞数过多，如果染色的时候不舍弃一些的话，会造成染色剂相对不足以及容易堵管。因此在做染色时需要调整细胞数。
4，我们实验室用软试管将加入冰乙醇的细胞封口，－20度保存，保存3个月没问题（我最长做的是3个月，老师们说半年没问题）。EP管如果封口严密也没有问题。

二、70%预冷酒精固定：

(注意控制细胞数量,大约1,000,000个左右,)

1, 细胞消化后用PBS洗一次,(最好用DMEM+胰酶消化,否则细胞不容易成但单细胞,且消化过程中不要去移动瓶子)

2,用200微升PBS制成细胞悬液,加预冷的70%酒精2毫升,边加边摇匀,后置4度冰箱,一般一个小时就差不多了,跟培养时间应该没多少关系

3,弃上清,PBS洗一次,然后加400微升PBS成细胞悬液,然后加50微升PI.后避光，送检。