流式细胞检测样本怎么保存?
(2012-08-20 16:21:30)
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多聚甲醛标记抗体检测流式细胞仪未标记杂谈 |
分类: 流式细胞检测服务文献 |
1. 流式细胞术检测样品推荐制备方法
A. 直接标记抗体(FITC标记抗体):
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml
PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA
和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1%
多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml
PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS
重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
友情提醒:最好不要采取各种方法过夜保存,尽量克服困难做到新鲜标本新鲜检测,以免实验结果有误。
如果没有多聚甲醛,最后用PBS洗涤后,再用PBS重悬即可,标本保持24小时没问题。过夜要注意4度避光保存。
如果想要了解更多流式细胞检测的价格请来电咨询:13671820875 联系人:宋老师