美白祛斑效能-测定参考方法

    酪氨酸酶是一种独特的具有多重催化功能的酶，一般认为在黑色素的生物合成过程中，酪氨酸酶起着关键性的催化作用。化妆品添加剂对酪氨酸酶催化能力的抑制作用是美白祛斑化妆品配方设计的重要参考依据。通常将氧化多巴或酪氨酸的能力作为酪氨酸酶的催化能力大小的判据，酪氨酸酶活性测定原理为分光光度法。

材料和方法
    1. 材料
    （1）试剂：L-多巴、酪氨酸、蘑菇酪氨酸酶（Sigma产品）；

（2）仪器：UV754型分光光度计
    2. 方法

方法一：

    将化妆品添加剂用1/15mol/L PH6.8磷酸缓冲液0.5ml稀释至待测浓度，准确吸取一定体积的溶液，与蘑菇酪氨酸酶100ul（60u）混和，在设定温度下孵育10min，加入3mmol/L L-多巴反应液2ml，继续孵育2min，迅速转移至比色皿中，立即于分光光度计475nm处测光吸收值A475。

酶激活或抑制率计算方法:

分光光度法必须测四组吸光值以计算酪氨酸酶激活或抑制率，

A：酪氨酸酶和L-多巴反应液吸光值

B：L-多巴反应液吸光值

C：酪氨酸酶和L-多巴反应液在添加剂存在下的吸光值

D：L-多巴反应液和添加剂溶液的吸光值

酪氨酸酶活性抑制率按下列公式计算：

      抑制率(%)=[ (A-B)-(C-D) ]/（A-B）×100

酪氨酸酶激活率按下列公式计算：

      激活率（%）=[（C-D）-（A-B）]/（A-B）×100，

方法二：

    以L-酪氨酸为底物进行酪氨酸酶的活性测定，将化妆品添加剂用1/15mol/L PH6.8磷酸缓冲液0.5ml稀释至待测浓度，准确吸取一定体积的溶液，和质量分数为0.1 %的酪氨酸溶液充分混合, 在设定温度下孵育10 min后,加入活度为150 U/mL的酪氨酸酶溶液,再在设定温度下孵育10 min,迅速转移至比色皿中,在475 nm处测吸光度。酶激活或抑制率计算方法同上。

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