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合成引物是很多分子实验都会用到的一种服务，速度和质量是很多老师在选择供应商时的重要考量。

随着广州实验室的投入使用，速度对金唯智的客户来说已不再是困扰。今天，小编带您走进金唯智的生产一线，为您剖析引物合成的两大关键质量因素——合成和纯化。

合成 |刨根问底知原理  

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引物合成是一种化学合成，一般都采用β--乙腈亚磷酰胺化学合成引物，合成时从3’→5’方向进行，通常3’端的第一个碱基结合在CPG (Controlled Pore Glass，CPG)上。

脱保护：脱掉附加在CPG单体上的第一个碱基5’-OH基团上的保护基 (DMTr)，准备附加下一个新的碱基。

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活化：活化新的碱基单体 (Phosphoramidite)，准备与第一个碱基进行反应。 

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偶联：第二个碱基与第一个碱基发生偶联反应。

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封闭：将没有反应的第一个碱基的5’-OH加帽封死 (Capping)，使其不再进一步参与反应。

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氧化：将核苷亚磷酸酯氧化成更稳定的核苷磷酸酯 （即将三价磷氧化成五价磷）。

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重复进行一至五的步骤，直至合成完所需的引物 DNA序列。合成结束后，将引物分子从CPG上切下，再进行进一步的纯化。

纯化 |量体裁衣做选择   

DSL（脱盐）纯化，PAGE纯化，HPLC纯化是目前常会用到的几种纯化方式。建议您根据自己合成引物的长度和后续实验的需要做出合适的选择。

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脱盐(DSL)：又称为简易反相柱，氨盐可以被有机溶液洗脱，但不会被水洗脱，能有效的去除盐分，纯度可满足大多分子生物学实验需求。

优点：速度快，价格优，通量大。

缺点：该方法不能有效去除比目的片段略短的引物小片段。

高效液相(HPLC)：采用高效液相色谱的原理，对引物DNA进行纯化是一种非常有效的纯化方式，能达到很高的纯度和灵敏度。纯化后，引物的纯度可大于90% 。特别适合用于短链（小于40 mer）引物和修饰引物的纯化。

优点：对纯化短链引物(＜40 mer)特别有效。

缺点：成本高，批量生产效率不高。

PAGE纯化：PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对DNA片段进行分离，然后从凝胶中回收目的DNA的方法。

tPAGE纯化和hPAGE纯化是金唯智针对原PAGE纯化技术进行升级后推出的两种引物纯化方式，可以应用于不同长度类型的引物，纯化效果优于PAGE纯化级别。

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