我们的RNAi载体构建，有以下选择：
1) shRNA干扰载体构建：短发卡RNA（shRNA）是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA（siRNA，19 - 21个核苷酸的
RNA双链)的DNA分子。我们可根据靶标设计短发卡RNA (shRNA)序列并将其克隆入shRNA载体上。
2) miRNA（microRNA）干扰载体构建：属于第二代RNA干扰载体平台，拥有更高干扰效率和RNA干扰片段设计成功率。
miR RNAi表达载体采用Pol II启动子表达人工设计的miRNA，后者从长的转录本被加工，进而导致特异性的mRNA的降解。
3) shRNAmir是用19nt的siRNA序列替代miRNA中的作用序列，保持miRNA的环和双臂结构。基于miRNA mir-30或miRNA
mir-155双臂结构的shRNAmir质粒载体RNAi效果更好：shRNAmir是目前效果最好的RNAi产品形式。
服务流程
1) 客户提供：基因的Accession Number
2) 针对特定基因，设计RNAi序列；合成该序列并退火生成双链DNA
3) 将DNA与RNAi载体相连，连接物转化大肠杆菌
4) 测定全长序列以鉴定序列的正确性；制备甘油菌
5) 提供数据分析和报告给客户
6) 我们提供：构建好的RNAi表达载体和相应的甘油菌
1.3 RNAi干扰服务
诺百优势
质量保证：针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中两条的Knockdown
效率达到70%（在转染效率大于80%的情况下）；针对某靶基因的4条http://s15/middle/93cd39b7tc616f338951e&690


miRNA序列，在转染效率>80%的前提下，我们保证至少2个克隆在mRNA
水平达到70%以上的Knockdown效率。
可针对客户选择的靶细胞系，进行转染条件的优化服务，以确定所选择
的细胞系的有效转染条件。
原理
在RNAi研究中，测定敲除效率时，通过转染控制的最适化，可以获得高敲除
效果。因此，为了将RNAi研究成功导入，需要对客户希望的细胞进行转染效
率的最适化工作。我们采用实时荧光定量PCR或免疫蛋白印迹法分析这些
RNA干扰序列对靶基因蛋白表达水平的抑制的有效性。
服务流程
1) 客户提供：选择的细胞系和详细的细胞培养的操作步骤；选择的靶基
因cDNA的序列号；抗体（如果需要Western blot检测）
2) 对需要用于转染的细胞进行细胞培养；
3) 优化转染条件：在荧光显微镜下检测Fluorescent Oligo或可表达GFP
的干扰载体的荧光强度，评估转染效率
4) 为靶基因设计一组siRNA双链或干扰载体
5) 采用实时荧光定量PCR或免疫蛋白印迹评估转染后某一时间点靶基因RNA水平或蛋白水平的变化
6) 可利用抗生素来筛选稳定表达shRNA或miRNA的细胞株
7) 我们提供：转染效率分析；Knockdown分析，包括实时荧光定量PCR检测、Western Blot图片等