免疫印迹常用的转移膜主要是硝酸纤维素膜(Nitrocellulose Blotting Membranes，NC)和偏二氟乙烯(PVDF膜,Polyvinylidene-Fluoride)，此外也有用尼龙膜、DEAE纤维素膜做蛋白印迹。膜的选择要根据a.膜与目的蛋白分子的结合能力(也就是单位面积的膜能结合蛋白的载量)，以及膜的孔径(也就是拦截蛋白的大小);b.不影响后续的显色检测(也就是适和用于所选的显色方法，信噪比好);c.如果后继实验有其他要求，比如要做蛋白测序或者质谱分析，还要根据不同目的来挑选不同的转移膜。

　　1. 硝酸纤维素(NC)膜

　　硝酸纤维素膜是蛋白印迹最广泛使用的转移介质，其优点是对蛋白有结合能力强，适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色;背景低，信噪比高;使用也很简便，不需要甲醛预处理，只须在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡;而且容易封闭，也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间，但是纯的硝纤膜在比较脆，容易卷，不适合用于需要多次重复清洗的用途。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜，小于20KD的话建议选择0.2um的，如果小于7KD的话最好选择0.1um的膜。另外由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时最好使用较温和的Tween20，而且浓度不要超过0.3%(据说0.05%效果最好)。常见生产公司有Schleicher & Schull;Millipore;PALL Invitrogen、GE(Amersham)、Santa Cruz 等

　　2.尼龙膜

　　尼龙膜更多是用于核酸的转移，也有见于蛋白印迹。与NC相比，优点是结合力强，结实，柔软不易卷曲，机械强度大，便于操作。缺点是背景高，而且当转移缓冲液中存在有SDS时蛋白质容易从尼龙膜上泄漏(通过甲醛固定可以缓解这一情况)。另外，不能直接染色.但是有些公司如pierce有的产品保有尼龙膜高灵敏度的优点和摒弃背景影响大的缺点，采用了合适的signal-to-noise 比例来调整，从而达到了200ug/cm2的蛋白结合能力，同时有比大多数尼龙膜甚至比一些NC膜都要小的低背景.

　　3.聚偏二氟乙烯(PVDF)膜

　　聚偏二氟乙烯(PVDF)膜作为基质的转印膜由Millipore公司在1985年首先推出。与硝酸纤维素膜相比，PVDF膜在蛋白质截留能力，机械强度和化学相容性上都更优越的性能(Pluskal,etal.,1986)。市售硝酸纤维素膜的典型结合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜结合量是100-200μg/cm2(而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍!)。在艾滋病毒(HIV)血清学检验中直接比较PVDF和硝酸纤维素膜，PVDF膜具有更好的截留总HIV抗原能力并提高抗体检测糖基化被膜抗原的性能。而且PVDF膜最大的优点是具有更好的机械强度和化学耐受性。这使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择;而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，如考马斯亮蓝染色后切出条带并进行N-末端测序、蛋白消化，肽分离，内部测序和免疫检测。特别是需要做N端蛋白测序，能经得起多次清洗。所以PVDF也是要做蛋白测序的唯一选择。此外，一些强疏水蛋白用PVDF膜效果会更好一些。PVDF膜适用的检测方法也不少，如化学发光、常规显色、同位素和标准染色，但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理(不超过15秒)再用缓冲液平衡。PVDF膜同样分0.45um和0.2um的，后者孔径小，对小分子蛋白有较好的拦截吸附，背景可能会比前者稍高。常见的公司有Millipore ，Bio-Rad，Pierce，Pall Life Science，Invitrogen，Whatman等。

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