引用方法：GB/T 4789.15—2003

方法概述： 样品处理后用PDA培养基和孟加拉红培养基28℃±1℃培养5d，观察并记录。

1目标菌群：霉菌和酵母。 

2主要仪器及材料

2.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。

2.2 恒温培养箱： 28 ℃±1 ℃。

2.3 均质器。

2.4 恒温振荡器。

2.5 显微镜：10×～100×。

2.6 电子天平：感量0.1 g。

2.7 无菌锥形瓶:容量500 mL、250 mL。

2.8 无菌广口瓶：500 mL。

2.9 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。

2.10 无菌平皿：直径90 mm。

2.11 无菌试管: 10 mm×75 mm。

2.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。

2.13 高压灭菌锅。

2.14 超净工作台。

2.15 水浴锅。

3 培养基和试剂

3.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基

3.1.1 成分

         马铃薯(去皮切块) 300 g

         葡萄糖 20.0 g

         琼脂 20.0 g

         氯霉素 0.1 g

         蒸馏水 1000 mL

3.1.2 制法

将马铃薯去皮切块，加1000mL 蒸馏水，煮沸10 min～20 min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000 mL。

加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装后，121 ℃灭菌20 min。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。

3.2 孟加拉红培养基

3.2.1 成分

         蛋白胨 5.0 g

         葡萄糖 10.0 g

         磷酸二氢钾 1.0 g

         硫酸镁（无水） 0.5 g

         琼脂 20.0 g

         孟加拉红 0.033 g

         氯霉素 0.1 g

         蒸馏水 1000 mL

3.2.2 制法

上述各成分加入蒸馏水中，加热溶化，补足蒸馏水至1000 mL，分装后，121℃灭菌20 min。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。

4检测程序：

4.125g（mL）样品+225mL无菌蒸馏水，均质 后10倍系列稀释。

4.2 选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液，各取1mL 分别加入无菌培养皿内。

4.3 每皿中加入15mL～20mL 马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基。.                       

4.4 28℃（±1℃）培养5天。

4.5 菌落计数。

5操作步骤：

5.1 提取

5.1 样品的稀释

5.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品至盛有225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10 的样品匀液。

5.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品至盛有225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。

5.1.3 取1 mL 1:10 稀释液注入含有9 mL 无菌水的试管中, 另换一支1 mL 无菌吸管反复吹吸,此液为1:100 稀释液。

5.1.4 按5.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管。

5.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液于2 个无菌平皿内。同时分别取1 mL样品稀释液加入2 个无菌平皿作空白对照。

5.1.6 及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

5.2 培养

待琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养5d，观察并记录。

5.3 菌落计数

肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位（colonyforming units，CFU）表示。

选取菌落数在10 CFU～150 CFU 的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。