蛋白酶抑制剂混合物（Protease Inhibitor Cocktail）

1.概述

蛋白酶抑制剂从广义上指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团结合，使蛋白酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白变性的物质。

在细胞或组织中提取纯化蛋白时需要破碎细胞，此时蛋白酶就会被释放出来或被激活，降解蛋白质，最终影响试验结果。为了避免这些情况的出现，在样品制备时尽可能在低温下进行。此外，许多蛋白酶在pH9以上就失活了，因此Tris碱，碳酸钠或碱性载体两性电解质往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述条件下仍然保持着活性，此时应当使用蛋白酶抑制剂。因此，选择有效的蛋白酶抑制剂对于蛋白纯化路线设计来讲显得尤为重要。

2.Protease Inhibitor Cocktail（蛋白酶抑制剂混合物）

蛋白酶抑制剂种类繁多，通常使用许多化学物质作为蛋白酶抑制剂，如PMSF和Leupeptin。而且由于一种蛋白酶抑制剂只对某一类蛋白酶起作用，因此通常建议复合使用蛋白酶抑制剂，如广谱蛋白酶抑制剂“鸡尾酒”，即Protease Inhibitor Cocktail。我公司提供一系列的蛋白酶抑制剂Protease Inhibitor Cocktail产品，适用于细胞裂解，蛋白提取和多种生化反应。根据不同的样本来源和实验要求，又分为5种Cocktail套装。这包括了专门用于细胞蛋白提取的Cocktail 1，多用途的蛋白提取Cocktail 2，专用于细菌蛋白提取的Cocktail 3，适用于组织、细胞核细菌蛋白提取的Cocktail 4，通用的细胞组织蛋白提取的Cocktail 5以及专用于细胞中His标签蛋白的提取纯化的Cocktail 6。

蛋白酶抑制剂混合物配方如下

苯丁抑制素(Bestatin)是氨基肽酶的抑制剂

       E-64是半胱氨酸蛋白酶的抑制剂

       Leupeptin是丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶的抑制剂

       Pepstatin A是天门冬氨酸蛋白酶的抑制剂

EDTA 和1,10-Phenanthroline 是金属蛋白酶抑制剂

Protease Inhibitor Cocktail 1 Cell（蛋白酶抑制剂混合物1）是一种细胞专用的蛋白酶抑制剂混合物，由AEBSF、EDTA、Leupeptin及Pepstatin A等组成，可以广泛抑制各种蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶以及类胰蛋白酶等，适用于抑制细胞裂解液中蛋白酶的活性。其中AEBSF是AppliChem独有的蛋白酶抑制剂，其通过磺酰化蛋白酶活性中心的一个基团，不可逆地抑制凝血酶thrombin和其他一些丝氨酸蛋白酶（chymotrypsin, kallikrein, plasmin, proteinase K, trypsin）。AEBSF是PMSF和DFP的低毒替代品，具有较高的水溶性，溶液状态的pH为酸性，且稳定性较高。EDTA能很好的通过螯合作用抑制金属蛋白酶的活性，而Leupeptin和Pepstatin A则分别对半胱氨酸蛋白酶、类胰蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶有较好的抑制作用。

3.酶抑制剂研究范畴

（1）.细胞调节过程的研究 (如老年痴呆症/肿瘤研究)

（2）.抗体，酶在诊断系统蛋白降解的抑制 (如诊断试剂盒)

（3）.为了避免在细胞裂解时蛋白酶释放的破坏作用

（4）.抑制由蛋白酶引起的组织裂解 (如细胞培养)

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