实验一 质粒DNA的提取及浓度测定

碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH12.0～12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。

当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。

溶液Ⅰ 50mM 葡萄糖 / 10mM EDTA / 25mM Tris-HCl，pH=8.0

葡萄糖增稠，使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA 抑制DNase的活性。这一步溶液中还可以加入RNase，不受EDTA影响，并且可以在后续步骤中被除去

溶液Ⅱ 0.2M NaOH / 1% SDS

破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。

溶液Ⅲ 3M 醋酸钾 / 2M 醋酸

这一步的K置换了SDS（十二烷基磺酸钠）中的Na，得到PDS（十二烷基磺酸钾）沉淀；SDS易与蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质也沉淀了，同时基因组DNA也被PDS共沉淀

SDS碱裂解法提取质粒DNA中加酚氯仿的作用是什么？

酚是强烈的蛋白质变性剂，能有效使蛋白质变性而除去，氯仿有强烈的脂溶性，去除脂类杂质，本身酚：氯仿：异戊醇=25：24：1的主要作用是抽提蛋白质

SDS碱裂解法提取质粒DNA中加酚氯仿离心后加异丙醇的作用？

异丙醇可以沉淀DNA和RNA（即核酸）

静置是为了增加沉淀效果

质粒DNA的提取过程中加入酚:氯仿:异戊醇的目的是什么

酚:氯仿:的目的是沉淀蛋白质原理如下：

酞与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。

水相异戊醇的目的是减少抽提过程中的泡沫产生，原理如下：

在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。