EdU细胞增殖检测方法_锐博生物

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EdU细胞增殖检测方法

(2011-06-08 10:41:44)

标签：

细胞增殖

edu

brdu

胸腺嘧啶

dna复制

分类： EdU

细胞增殖是生物体的重要生命特征，如何简单，快速，方便地进行细胞增殖检测是细胞生物学的重要课题。

EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo^®荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

超越BrdU

与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU与T非常相似，而EdU染料只有BrdU抗体的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等），可有效避免样品损伤，而且无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更准确地反映DNA复制活性。

http://s6/middle/80ec9c84ge73a78ec9af5&690
图1 BrdU需要DNA变性后才能与抗体结合，导致BrdU、Hoechst染色弥散，边缘模糊不清；而EdU边缘清晰完整，检测更灵敏、更准确

细胞实验

细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。EdU细胞增殖检测方法通过检测渗入DNA复制期间的EdU，借助荧光检测工具即可准确地检测出新增殖的细胞，快速统计处于S期的细胞百分数，分析细胞增殖情况。该方法简单、灵敏、快速、准确，适合各种细胞系的细胞增殖检测，尤其适用于高通量筛选试验，如在药物筛选中检测加药后细胞增殖变化。

表1 细胞实验EdU孵育浓度及时间参考

PubMed ID	Reference	Cell line	Concentration	Time
18272492	Salic A. (2008) PNAS.	NIH3T3, Hela	10 nM to 10 μM	1 hr
18521918	Cappella P. (2008) Cytometry A.	HL-60, A2780, U2OS	1~10 μM	30 min
18996411	Chehrehasa F.(2009). J Neurosci Methods.	Neurospheres	1~20 μM	24 hr
19179371	Limsirichaikul S.(2009) Nucleic Acids Res.	Human primary fibroblasts	10 μM	0.5,1,2,4 hr
19253396	Warren M. (2009) Dev Dyn.	Chick embryos	10 μM to 2 mM	4 hr
19647746	Yu Y. (2009) J Immunol Methods.	Spleen cells	50 μM	24 hr
19544417	Momcilović O. (2010) Stem Cells.	Human ES cells	10 μM	30 min
20080700	Cinquin O. (2010) PNAS.	emb-30	1 μM	12 hr
20025889	Han W. (2010) Life Sci.	VSMC	50 μM	2 hr
20659708	Huang C. (2010) J Genet Genomics.	ESC	50 μM	2 hr
21310713	Hua H. (2011) Nucleic Acids Res.	fission yeast strains	10 μM	3 hr
20824490	Lv L. (2011) Mol Cell Biochem.	EJ cells	50 μM	4hr
21248284	Yang S. (2011) Biol Reprod.	GC cells	50 μM	2 hr
21227924	Zhang YW. (2011) Nucleic Acids Res.	U2OS, HT29	30 μM	90 min

注：如果您有采用BrdU进行实验的经验，可以参照BrdU实验的相关参数进行EdU实验

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图2 绝大部分细胞系均适合进行EdU细胞增殖方法检测，

动物实验

EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，分子量很小，在动物体内能够迅速扩散到各种组织和器官中，并渗入正在复制的DNA分子，通过基于Apollo^®荧光染料与EdU的特异性反应即可简单、快速、准确地检测出细胞增殖情况。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法用量小得多，十分之一的用量即可获得与BrdU检测试剂盒相同甚至更好的检测结果，而且小分子化学反应检测方法反应快，效率高，反应时间仅需几分钟，不需要DNA变性、蛋白酶处理、抗原抗体过夜孵育，能够更好地保护细胞形态，更简单、更灵敏、更快速、更准确。

表2 动物实验EdU标记时间及剂量参考

PubMed ID	Reference	Species	Method	Amount	Time	Tissue
18272492	Salic, A. (2008) PNAS.	Mice	腹腔注射	100 μg	96hr	Brain
19554638	Kaiser CL. (2009) Laryngoscope.	Chicken	皮下注射	50mg/kg	72hr	Cochlear
19494148	Guo F. (2009) J Neurosci.	Mice	腹腔注射	100 μg/g body weight	3hr	Brain
19179611	Tibor Z. (2009) Am J Pathol.	Mice	腹腔注射	50mg/kg	3hr/20hr	-
20664699	Wiley LA. (2010) Mol Vis.	Mice	腹腔注射	100~200 μg	1hr	Eye
20163731	Schmidt EJ. (2010) BMC Dev Biol.	Mice	腹腔注射	200 μg	30min	embryo
20064490	Zeng C. (2010) Brain Res.	Mice	腹腔注射	50mg/kg	4hr~30d	Brain
20038597	Janas ML. (2010) J Exp Med.	Mice	腹腔注射	100 μg	4hr	Thymi
21145612	Sun H. (2011) J Hepatol.	Mice	腹腔注射	100 μg	72hr	-

注：如果您有采用BrdU进行实验的经验，可以参照BrdU实验的相关参数进行EdU实验。

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图3 EdU动物实验用量小，灵敏度高，1周内观察无需重复注射，即可分析多种组织器官

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