lncRNA RACE技术服务

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分类: ncRNA |
1.lncRNA基因调取服务
◆已知序列基因
① 原核生物 原核生物基因没有内含子,可直接提基因组DNA进行PCR扩增,TA克隆测序。
② 真核生物 真核生物基因有内含子,需要提取总RNA反转录为cDNA,设计特异性引物进行PCR扩增,TA克隆测序。
◆未知或已知部分序列基因RACE服务 RACE,即cDNA末端快速扩增技术(Rapid
Amplification of cDNA Ends,RACE),是利用PCR技术由已知的部分cDNA序列来获得完整cDNA末端的方法,又称为锚定或单边PCR。有两种RACE方法,分别用于扩增5′端或3′端,从而得到全长基因的cDNA。
◇ 操作流程
① 5′RACE服务
② 3′RACE服务
◇ 服务说明
①请您尽量提供目的基因表达量高的单一样品,提取总RNA的实验材料要新鲜,采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂。最好能说明该基因在不同组织的表达丰度,如果基因的丰度较低或者未知序列较长,请提供尽量多的实验材料。
②如果提供RNA样品,要求总RNA无降解,无DNA污染,OD260/OD280:1.8-2.0。3'
RACE实验要求总RNA量大于15
μg,5' RACE实验要求总RNA量大于25
μg。
③请提供大于100 bp的已知序列及方向(请注明已知序列的5′ 端及3′ 端);如果已知序列比较短,建议先进行3′ RACE再进行5′
RACE,以提高实验的成功率。
④我们会根据已知序列进行特异性扩增验证,如果验证结果与您提供的序列完全不符,如果得不到目的序列或为非目的基因的序列,我们将停止实验并收取实验成本费用。如果验证结果与您提供的序列有个别碱基不符,我们在征求您的意见后决定是否进行RACE实验。
⑤由于mRNA存在个体和组织差异或基因的序列特殊,RACE的PCR产物测序有时会有个别碱基是套峰或测不通的情况,对未测通部分可继续进行克隆测序,最终提供两个质粒的测序结果,碱基的准确性由客户自行判断。
⑥如果根据已知序列进行特异性扩增,得不到目的序列或为非目的基因的序列,将收取样品的验证费、Total
RNA提取费和RACE耗材费,5′RACE收取500元/样品,3′RACE收取200元/样品。同一样品同时进行5′RACE和3′RACE服务收取600元/样品。
◇提供结果
实验报告(包括PCR产物照片、测序结果等)、扩增全片段测序报告一份(测序彩色波形图、测序方向图、碱基序列图)、引物,如果产生克隆测序将提供测序用的质粒,含未知末端片段的质粒载体及细菌一份。======================================================================================
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Mix,酶、核酸纯化等产品
代理品牌
免疫学:抗体及其ELISA试剂盒-------Abcam、Epitomics、Biovision、Abgent(全面的免疫学产品)、Santa
Cruz、CST、R&D
荧光类:SYBR/Biotium
(核酸凝胶染色试剂、EvaGreen荧光染料、CF染料等荧光试剂)
动物类:各种动物模型
综合类:Corning/Axygen/BD/FISHER(耗材)、MERCK、Millipore、Invitrogen、Roche、Sigma等
仪
器:各种类型小型仪器等