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放线菌抑制实验的设计

(2017-05-15 22:03:28)
标签:

抑菌圈

抗生素

牛津杯

对峙培养实验

划线抗菌谱

分类: 生物化学
     放线菌的分泌产物,包括了抗生素类的物质,可以抑制某些细菌,甚至真菌在这个放线菌旁边的生长。你可以称作“抑菌圈”,具体的表现有各式各样:
放线菌抑制实验的设计
    用十字交叉法测量抑菌圈直径,并观察菌圈透明程度和边缘整齐程度
     当然,在这些实验结果里,有的没有抑制现象。
放线菌抑制实验的设计
    这是用“牛津杯”做液体发酵产物的抑菌测定,注意,这时没有放线菌细胞,只有分泌在液体中的次生代谢产物。
放线菌抑制实验的设计
      A平皿里还有三个“牛津杯”里的物质,没有抑制这种菌的作用。平皿里只有放线菌以外的一种生物。ABC分别是培养的三种菌。
放线菌抑制实验的设计
     要测试N种生物,就要有N个平皿来做实验!
     还有一种做法,是把“非放线菌”生长物打孔,移植到新培养基上生长(下图的左面二个平皿),再打孔,里面加注放线菌发酵液,右面的图显示,有抑制作用。
放线菌抑制实验的设计

     对峙培养实验,划线实验
     对峙,不等于只做二个布点。不是用“牛津杯”,是用“放线菌菌饼”。
放线菌抑制实验的设计
    上图,“非放线菌”菌饼被打孔器起出来,直径5毫米,“反贴”放在平皿中央。“放线菌”菌饼被打孔器起出来,2个,每个直径也是5毫米(还可以用灭菌牙签直接挑取放线菌克隆)。放置时距离“非放线菌”菌饼25-30毫米。4天后(5-7天)观察抑菌效果。“抑菌带”就是不长菌的区域。对照是仅仅接种“非放线菌”。在这个实验里,“非放线菌”具有生长菌丝的能力,对于细菌,不合适。黄瓜枯萎病菌有菌丝生长能力。对于细菌,用“管碟法”发酵液测定合适。

     “划线法”是把放线菌菌饼“反贴”放在中间,在距离中心25-30毫米的同心圆的范围里,把不同“非放线菌”沿着切线分别划线,4天后(5-7天)观察抑菌效果。在这个实验里,“非放线菌”具有生长菌丝的能力,对于细菌,也是不合适。


放线菌抑制实验的设计

    发酵培养液配方很重要,诱导放线菌分泌合成的抗生素。菌饼换成了“非放线菌”。
放线菌抑制实验的设计

放线菌抑制实验的设计
   
  “抑菌带”一般是描述“划线法”时使用。
放线菌抑制实验的设计
  对“非放线菌”的抑制,定义为在平板上生长放线菌的一侧,“非放线菌”菌丝生长量较少和生长轻微停滞。
  +++.抑制圈≥2.0cm的非常强烈抑制。
  ++.抑制圈≥1.0cm的非常强烈抑制。
  +.生长明显停滞,放线菌菌落周围有明显的抑制圈。
  ±.对
“非放线菌”有轻微的抑制(菌丝生长量较小和生长停滞)
  使用体外平板试验,检测这些分离物抑制
“非放线菌”生长的能力。将每种放线菌划线接种到玉米粉琼脂(CMA)板中心的一侧。将培养物在25℃培养大约8天或直到培养物形成孢子。然后将含活跃生长的“非放线菌”菌丝体的CMA琼脂块(0.5cm2)无菌放置到平板中央。继续培养96小时。48小时和96小时后检查对“非放线菌”生长的抑制。当在放线菌菌落方向“非放线菌”
菌丝体的生长停滞或受阻时,表明有抑制作用。

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