Michaelis-Menten方程的实验计算要点：

    底物浓度梯度，做实验时是从高做到低，那么最后作图时，横坐标要求从低到高，由左向右作图，没有问题。因为米氏常数作图的坐标值是“倒数”。比如，先是浓度为1/2 ，后是浓度为1/100，那么经过1/[S]，表示由左向右，是2和100。

    底物浓度为1/2，反应速度肯定高，但经过“倒数”处理，1/V，分母越大，1/V越小。所以在二维图上面，依然是由左下向右上的线性。

    在EXCEL软件中，输入X与Y二组数据，X是横坐标，Y是纵坐标，做散点图，点击回归曲线。回归曲线计算，那么Y为0时，X的值（绝对值），就是1/Km。1除以该X值，就得到Km。   

    反应速度V，即产物在单位时间内的生成量。

    根据不同的[S]和测得的不同V，求出相对应的1/[S]和1/V，并列表。

    例如：

管  号           1        2        3         4         5       

[S]            9.50      7.16     4.75      3.80       2.85

1/[S]           0.11      0.21     0.31      0.53       0.94

    即1除以9.5，等于0.105，约等于0.11，以此类推。

    反应速率，用麦芽糖梯度浓度做标准曲线，从实验样品的A520吸光度，在标准曲线上找出对应的产物浓度值。产物浓度值是V。

    1/V是纵坐标。初反应的曲线，是双曲线，也就是，一开始反应速率大，然后逐渐变小。那么，实验结果，就是V一开始大，然后逐渐变小。因此，1/V是纵坐标，一开始小，然后逐渐变大。符合作图习惯。

    求Km值，还可用1/A，代替1/V，A为吸光度。近似地求Km值（假定吸光度正比于反应速率）。

    ∵  1/V = Km/Vmax﹒1/[S] + 1/ Vmax

          V = P/t = Au/As﹒C/t

          Vmax = Amax/As﹒C/t

    ∴  1/Au = Km/Amax﹒1/[S] + 1/ Vmax

    注：Au是实验样的吸光度，As是标准样的吸光度，Ac是对照样的吸光度，Ab是空白样的吸光度。 

    因此，可以用1/Au对1/[S]作图，直线在1/[S]轴上的交点也是- 1/Km，从而可算出Km值。

    在反映体系中分别加入底物后混匀，假设反应5分钟，假设用520nm波长测定，设空白调零点，读记A。此时 反应速度V＝A／5。

    淀粉酶(Amy，EC3.2.1.1)属水解酶类，分为α、β两类，人体中淀粉酶属α-淀粉酶，主要由胰腺和唾液腺分泌。Amy活性的准确测定依赖于测定方法的标准化。Amy的测定方法不下200种。

    真菌α-淀粉酶Km为5.470mg·mL-1、Vm为1.587mg·(mL·min)-1；

    中温α-淀粉酶的米氏常数Km为21.200mg·mL-1,最大反应初速度Vm为1.482mg·(mL·min)-1；

    糖化酶的米氏常数Km为3.131mg·mL-1,最大反应速率Vm为0.600mg·(mL·min)-1；

    耐高温α-淀粉酶水解荞麦淀粉其米氏常数Km为4.967mg·mL-1,最大反应速度Vm为0.345mg·(mL·min)-1。

    α—淀粉酶对魔芋淀粉的降解,米氏常数为Km=6.02mg/mL, Vmax=0.6587 mg/mL·min。