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ELISA法检测白细胞介素-2

 文章来源：优尔生

    IL-2来源于活化的T淋巴细胞，主要由活化的CD；辅助性T细胞(T helper lymphocyte，Th)产生，其主要生物学效应表现为：诱导活化T淋巴细胞及胸腺细胞生长，诱导T淋巴细胞产生淋巴因子，诱导T淋巴细胞的细胞毒作用，增强NK细胞、LAK细胞及单核细胞的细胞毒作用，加强活化的B细胞增殖及分化。IL-2受体(1L-SR)又可分为：T、B细胞及NK细胞表面的胞膜IL-2受体(mlL-2R)和可溶性IL-2R(slL-2R)两种。其中，IL-2复杂的生物学作用是通过IL-2R介导的，而IL-2又可诱导T淋巴细胞表达IL-2R，故Th产生IL-2和表达IL-2R是调节细胞免疫和体液免疫的中心环节，在细胞因子网络中处于核心地位，在免疫应答过程中起着非常重要的作用。

    [检测方法]  ELISA法

    [方法学原理]  在微孔反应板上包被抗人IL-2单克隆抗体，待测标本和标准品中的IL-2会与抗人IL-2单克隆抗体结合，游离的成分被洗去，同时加人生物素化的抗人IL-2抗体和HRP标记的亲和素。生物素与亲和素特异结合，抗人IL-2抗体与结合在单克隆抗体上的人IL-2结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色剂，若反应孔中有11．-2，HRP会使无色的显色剂呈现蓝色，加终止液变黄色。在波长450nm处测吸光度，IL-2浓度与吸光度成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中的IL-2浓度。[标本准备]  静脉血2ml，不抗凝。

    [试剂]

    1．预包被微孔反应板

    2．浓缩酶结合物

    3．酶结合物稀释液

    4．标准品和标本稀释液

    5．浓缩生物素化抗体

    6．IL-2标准品    ．

    7．浓缩洗涤液

    8．显色剂A、B

    9．终止液

    [仪器]  酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [检测步骤]

    1．在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品IOOul，再加生物素化抗体工作液50gl。

    2．振荡混匀，置20～25℃环境中温育120min。

    3．将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。

    4．除空白孔外，加入酶结合物工作液100u1。

    5．振荡混匀，置20～25℃环境中温育30min。

    6．将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。

    7．每孔加人显色剂A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色10min。

    8．加入终止液50gl后，轻轻振荡混匀。用酶标仪(450nm波长)测定各孔吸光度，与标准曲线对照，求出IL-2值。

    [正常参考值]  各实验室可根据检测方法的不同确立正常参考值范围。

    [注意事项]

    1.试剂盒从冷藏环境中取出时应在室温中平衡30min后方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封保存。

    2．酶标板洗涤时各孔均需加满洗涤液，防止孔内有游离酶不能洗净。应设定30-60s的洗涤浸泡时间。

    3．滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体混匀。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确(注意：勿将试剂滴在孔壁上)。

    4．所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为2mol／L硫酸，使用时应注意安全。

    5．每批样本应同时做标准曲线。

    6．检测剂工作液按说明书临用前配置。

    7．若标本OD值在标准曲线测定范围以外，应适当稀释后重测。

    [临床意义]  在某些病毒性疾病中，如反复发作尖锐湿疣、重症肝炎、慢性病毒性肝炎等患者中，IL-2显著降低。

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