加载中…
个人资料
  • 博客等级:
  • 博客积分:
  • 博客访问:
  • 关注人气:
  • 获赠金笔:0支
  • 赠出金笔:0支
  • 荣誉徽章:
正文 字体大小:

酵母激活实验方法(半乳糖苷酶滤纸印记实验)

(2014-04-30 11:10:56)
标签:

教育

分类: 专业相关

A.       Z缓冲液( 1L)Na2HPO4 .7H2O 16.10 gNaH2PO4 H2O 5.50 gKCl 0.75 g MgSO47H2O 0.246 g,用超纯水定容至1 L,调pH值至7.0,高压灭菌后室温保存备用。

B.        X-gal贮存液:用N-N-二甲基甲酰胺配制成20 mg/mL的贮存液,-20℃避光保存。

C.        Z缓冲液+ X-gal溶液:将上述Z缓冲液和X-gal贮存液按以下比例混合: X-gal 1.67 mLβ-巯基乙醇贮存液0.27 mL配置成100 mL Z缓冲液,现用现配。

 

半乳糖苷酶滤纸印迹操作步骤:

A.       转化后长出的酵母菌按比例稀释并点到SD-Trp培养基上,点圆点,吹干并将平板置于30℃培养箱培养3-4天,待其长出乳白色的菌落便可用于印迹实验;

B.        取出一个灭过菌的干净的培养皿并加入2.5-3.5 mL Z缓冲液+ X-gal溶液,取和培养皿大小一致的一张无菌滤纸置于溶液中浸透;

C.        将另一张圆形的干燥的无菌滤纸轻轻放在菌落生长旺盛的SD/Trp平板上,使滤纸和菌斑充分接触;

D.       静置片刻待滤纸完全浸润后将其取出,保持有菌面朝上,在液氮中浸泡30 s-60 s

E.        待滤纸完全冰冻变硬以后,将带菌的滤纸从液氮中取出室温化冻;

F.        将滤纸置于B步骤准备的滤纸,有菌面朝上,尽量避免滤纸和滤纸之间产生气泡;

G.       盖上盖,并将培养皿置于30 ℃培养箱中反应, 0.5-4 h后观察结果。

 

0

阅读 收藏 喜欢 打印举报/Report
  

新浪BLOG意见反馈留言板 欢迎批评指正

新浪简介 | About Sina | 广告服务 | 联系我们 | 招聘信息 | 网站律师 | SINA English | 产品答疑

新浪公司 版权所有