二　颜色反应

1）浓H2SO4-醋酐（Liebermann-burchard） 反应

    样品溶于冰醋酸，加浓硫酸-醋酐(1:20)，产生黄→红→ 紫→ 蓝等颜色变化，最后褪色。

2）三氯化锑或五氯化锑（kahlenberg）反应

     将样品醇溶液点于滤纸上，喷以20%三氯化锑（或五氯化锑）氯仿溶液（不应含乙醇和水）干燥后，60-70 ℃加热，显黄色、灰蓝色、灰紫色斑点，在紫外灯下显蓝紫色荧光（甾体皂苷则显黄色荧光）。

 3）三氯醋酸（Rosen-Heimer）反应

   样品溶液点于滤纸上，喷25%三氯醋酸乙醇溶液，加热至100℃，显红色→紫色斑点。

4）氯仿-浓硫酸（salkawski）反应

　　将样品溶于氯仿，加入浓硫酸后，在氯仿层呈现红色或兰色，硫酸层有绿色荧光出现。

5）冰醋酸-乙酰氯（Tschugaeff） 反应 　　

    样品溶于冰醋酸，加乙酰氯数滴及氯化锌结晶数粒，稍加热，则呈现淡红色或紫红色。

3. 皂苷的表面活性

皂苷具有表面活性的现象：皂苷水溶液经强烈振摇能产生持久性的泡沫，且不因加热而消失。

皂苷的溶血作用：当皂苷水溶液与红细胞接触时，红细胞壁上的胆甾醇与皂苷结合，生成不溶于水的复合物沉淀，破坏了红细胞的正常渗透，使细胞内渗透压增加而发生崩解，从而导致溶血现象。

皂苷的水溶液注射进入静脉中，毒性极大，低浓度就能产生溶血作用；

皂苷的水溶液肌肉注射，容易引起组织坏死；

皂苷口服则无溶血作用，可能与其在肠胃不被吸收有关。

皂苷叫皂毒素，是就其有溶血作用而言。

溶血指数：指在一定条件下能使血液中红细胞完全溶解的最低浓度。如甘草皂苷，溶血指数1：4000，溶血性能较强。根据溶血指数，计算皂苷的含量。如：某药材浸出液测得的溶血指数为1:1M，所用对照标准皂苷的溶血指数为1：100M，则药材中皂苷的含量为1％。

并不是所有的皂苷都具有溶血作用，皂苷溶血活性还与糖基部分有关

皂苷溶血活性还与糖部分有关，以单糖链皂苷溶血作用明显，某些双糖链皂苷无溶血作用，可是经过酶解转为单糖链皂苷，就具有溶血作用。

其他成分的溶血作用和抗溶血作用

植物粗提液中有一些其他成分也有溶血作用，如： 某些植物的树脂、脂肪酸、挥发油等也能产生溶血作用；鞣质则能凝集血细胞而抑制溶血。

皂苷的沉淀反应：皂苷的水溶液可以和一些金属盐类如铅盐、钡盐、铜盐等产生沉淀。

  酸性皂苷（三萜皂苷）的水溶液加入(NH4)2SO4、Pb(Ac)2或其他的中性盐类即生成沉淀。

  中性皂苷（通常指甾体皂苷）的水溶液则加入碱式Pb(Ac)2或Ba(OH)2等碱性盐类才能生成沉淀。

第六节 提取与分离

一、苷元的提取与分离（一） 提取 1.醇提，提取物直接进行分离；2.醇提，有机溶剂萃取； 3.制备成衍生物再进行分离；4.将皂苷进行水解，有机溶剂提取；

（二）分离

硅胶吸附柱层析、：获得原生苷元的方法1. 两相酸水解2. 酶水解3. Simth  degradation

三萜化合物的分离

填料：硅胶（常用）

溶剂系统：石油醚－氯仿、苯－乙酸乙酯、氯仿－乙酸乙酯等。常压、低压、MPLC、HPLC

二、三萜皂苷的提取与分离

特性：由于糖分子的引入，极性基团明显增多，致使极性增强，故具有较大的极性而易溶于醇类溶剂、含水醇及水。难溶于弱极性的有机溶剂。

◆常用的提取方法：用甲醇或乙醇提取－石油醚等脱脂－正丁醇萃取－总皂苷 或者 用甲醇或乙醇提取－大孔吸附树脂柱－总皂苷

三萜皂苷的分离

1.　分配柱层析法    以硅胶为支持剂，CHCl3-MeOH-H2O，CH2Cl2-MeOH-H2O，EtOAc-EtOH-H2O或水饱和的正丁醇等溶剂系统洗脱。

2. 反相层析法  　　以反相键合相RP-18、RP-8或RP-2为填充剂，常用CH3OH-H2O或乙腈-水为洗脱剂。常用反相填料（RP)是由普通硅胶经过化学修饰，键合上长度不同的烃基、形成亲油表面而成。

Sephadex  LH-20是由葡聚糖G-25羟丙基加工而成，属于分子筛凝胶。

三萜皂苷分离实例

1.如果某一混合物中含有人参皂苷Rc，Rd和Rg3，请用RP-18进行分离，并写出化合物流出的先后顺序。

结论：洗脱的先后顺序为：Rc>Rd>Rg3

第七节　结构测定

1、化学法

用Liebemman-Burchard反应和Molish反应鉴定三萜皂苷。

通过苷键裂解，而到小分子的苷元和糖，使结构测定简单化。

苷元结构确定可采用氧化、还原、脱水、甲基或双键转位、乙酰化、甲酯化等化学反应将未知苷元结构转变为已知化合物，然后将其IR、mp、Rf或其它光谱数据与已知物数据对照的方法推测其结构。

二、三萜的波谱特征

1、紫外光谱(UV)

结论：共轭体系使π　π*跃迁向长波方向移动（红移）。共轭体系越大向长波方向移动移动越大。结构中有一个孤立双键:205-250nm 处有微弱吸收;

麦氏重排：条件：分子中存在一个不饱和基团， γ位置的H能够移动。

RDA开裂：环己烯结构类型的化合物能发生RDA开裂，一般生成一个带正电荷的共轭二烯游离基和一个中性分子。

小结：第一节       掌握三萜及三萜皂苷的定义   

      第三节       掌握四环三萜的结构分类，每种类型的主要结构特点及代表化合物。   

      第四节       掌握五环三萜的结构分类，每种类型的主要结构特点及代表化合物。  

第五节       掌握三萜类化合物的颜色反应，三萜皂苷的表面活性和溶血作用。

第六节       熟悉三萜类化合物提取分离的一般方法。

第七节     了解三萜类化合物的一般的光谱特征及其在结构鉴定中的应用。

思考：1、取两只试管，各装1ml远志水提液，分别加2ml0.1M的HCl和2ml0.1M NaOH，强烈振摇1min，比较两只试管的泡沫高度。

2、取两只试管，各装1ml麦冬水提液，分别加2ml0.1M的HCl和2ml0.1M NaOH，强烈振摇1min，比较两只试管的泡沫高度。

3、某植物的水溶液：1.振摇后产生大量泡沫；2. 加入鞣质后产生白色沉淀；3.将水该溶液煮沸后再振摇，泡沫显著减少，表明此植物中含有：     A　粘液质　　B 皂苷　　 C　蛋白质　　D 多糖

4、人参总皂苷的酸水解产物进行硅胶柱色谱分离，可得到（　　）

A 　20(S)-原人参二醇    B　20(S)-原人参三醇    C　人参三醇    D　人参二醇    E　齐墩果酸

思考：1．简述熊果酸与齐墩果酸的红外光谱区别。

2．简述柴胡皂苷a的分子组成，及在提取过程中为什么要加入少量吡啶。

3．《药典》人参鉴别方法：取试样0.5g，加乙醇5ml，振摇5min，滤过。取滤液少量，置蒸发皿中蒸干，滴加三氯化锑饱和的氯仿溶液，再蒸干，显紫色。试解释，与三氯化锑显色成分是什么，为什么用乙醇提取？

4．简述四环三萜皂苷元结构的异同点。

5．哪些试验常用于检测药材中皂苷的存在？