百年堂阿胶,必为真胶,心为真心,方为古方,皮为驴皮,胶为真胶,价为实价。
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阿胶的主要成分是骨胶原(collagen)及其水解产物,含氮13%~16 %。水解产生18种以上氨基酸(包括8种人体不能合成的必需氨基酸)。含糖胺多糖(氨基多糖),主要是透明质酸(HA)、硫酸皮肤素(Ds)、纤维粘蛋白,大分子环酮、胆甾醇、胆甾醇脂和少量蜡双脂,及27种微量元素(其中8种必需微量元素)等。
(一)氨基酸分析
阿胶块用6N盐酸110℃水解36小时,用氨基酸自动分析仪分析,结果表明,阿胶中含有18种以上氨基酸(包括8种人体不能合成的必需氨基酸),分别为赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、门冬氨酸(Asp)、苏氨酸(Thr)、丝氨酸(Ser)、脯氨酸(Pr0)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、甲硫氨酸(Met)、异亮氨酸(Iso)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)、羟脯氨酸(Hyd)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Try)、半胱氨酸(Cys)等。其中,以甘氨酸、脯氨酸含量最高,其次是精氨酸、谷氨酸、丙氨酸、赖氨酸,胱氨酸(Cys)未检出。
孟正木等对山东阿胶、新疆鹿角胶进行总氮、蛋白质含量及水解氨基酸的定性、定量分析。
总氮及蛋白质的含量测定:本实验用常量按凯氏定氮法,即精密称取鹿角胶、阿胶0.2克左右,经消化、蒸馏、滴定,测得总氮乘6.25即为蛋白质含量。结果阿胶总氮量为5.84 %,相当于蛋白质98.84 %;鹿角胶总氮含量为13.22%,相当于蛋白质82.49 %。
水解氨基酸的定性分析:采用双向薄层层析法,对阿胶、鹿角胶进行薄层层析,结果阿胶、鹿角胶均含有19种氨基酸,从斑点面积的大小观察,其中甘氨酸、精氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸的含量较高。
水解氨基酸的定量分析:薄层定性指出,阿胶、鹿角胶氨基酸种类是一致的。为比较各个氨基酸量的多少,进行胶剂水解后各氨基酸的定量,仪器为KLA一5型氨基酸定量分析仪。结果二者的含量是有差异的。阿胶总氨基酸含量为41.34%,鹿角胶为33.44%,含量差别显著的氨基酸有酪氨酸、甘氨酸。阿胶、鹿角胶都含有色氨酸和羟脯氨酸,因无标准品而未测含量(表4—4①)。
陈定一等对山东阿胶、宁夏阿胶、张家口阿胶、北京阿胶等进行了氨基酸分析。
样品磨碎后称取60毫克,于5毫升硬质安瓿中,加6摩尔/升盐酸5毫升,通氮驱赶空气后立即封口。在烘箱中用105℃(±2℃)水解24小时。冷却后,取出水解液过滤,用超纯水定容至50毫升。吸取上述溶液2毫升,在水浴上蒸干,再加入超纯水,蒸发至干,如此反复3次。准确加入o.02摩尔/升盐酸4毫升,即可做氨基酸分析。结果四种阿胶中均有16种氨基酸,氨基酸总量山东阿胶为78.76%,宁夏阿胶55·33%,张家口阿胶6 7.51 %,北京阿胶46.22%,氨基酸总量以山东阿胶为最高,其中除丝氨酸、脯氨酸以外,所含各类氨基酸量均高于其他厂家的产品。但各阿胶中氨基酸总量均以甘氨酸含量为最高(平均值为18.33%),其次为脯氨酸(平均值为9.4%)及谷氨酸(平均值为8.63%)(见表4—4②)。
王龙等用氨基酸自动仪(日立853型)分别对阿胶(山东)、海龙胶(山东)、龟板胶(湖北)、鹿角胶(新疆)、黄明胶(山东)、鳖甲胶(安徽)六种补胶的氨基酸进行分析,结果六种补胶都含有18种氨基酸,氨基酸总含量顺序为:黄明J~(79.444%),鳖甲胶(73.261%),阿胶71.075%),龟板胶(70.679%),海龙胶(69.508%),鹿角胶(67.078%)。阿胶与海龙胶中不含胱氨酸(见表4—4③)。
刘良初用日立KLA一5氨基酸分析仪对新疆阿胶、北京阿胶、山东阿胶的总氮、氨基酸进行分析。
总氮及蛋白质的含量测定:取样品粉末约0.2克,按凯氏定氮常量法,消化,蒸馏,滴定,测得总氮乘6.25即为蛋白质含量。结果新疆阿胶总氮量为12.68%,相当于蛋白质79.25%;北京阿胶总氮含量为11.93%,相当于蛋白质7 4.56.%;山东阿胶总氮含量为13.58 oA,相当于蛋白质84.94%。蛋白质含量以山东阿胶为最高,北京阿胶最低。
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阿胶中蛋白质水解后氨基酸分析:取样品粉末约60毫克,直接称入5毫升硬质安瓿,加6N盐酸5毫升,封口,在105~Ci2 oc水解24小时。水解后放冷,取出水解液过滤,滤液在水浴上蒸干,再加水溶解,再次蒸干,使盐酸挥尽,加水溶解,调pH为2.2,过滤,使水溶液浓度为0.6毫克/毫升,作自动氨基酸分析,结果三种阿胶中均有17种氨基酸,氨基酸总量新疆阿胶为5lI 31%,北京阿胶为47.69%,山东阿胶为51.94N,氨基酸总量以山东阿胶为最高,北京阿胶最低(见表4--4④)。
山东平阴阿胶厂(现山东福胶集团)对山东阿胶和新阿胶进行含氮量及氨基酸定性、定量分析。
含氮量分析:按中国药典新版附录部分规定氮测定法测定,结果含氮量:阿胶为14.19%,新阿胶为13.20 %。
水解氨基酸定性分析:阿胶块溶于6N盐酸封闭管,110~C水解34小时,分别做硅胶一羧甲基纤维素薄层板单向和双向层析。结果表明,阿胶和新阿胶显示相同的氨基酸斑点,且均含19种氨基酸。
水解氨基酸定量分析:阿胶块溶于6N盐酸封闭管,IIO~C水解36小时,用氨基酸自动分析仪分析。结果表明,阿胶和新阿胶均含有18种氨基酸,阿胶氨基酸总量为67.3063%,其中包括8种人体不能合成的必需氨基酸(见表4--4⑤)。
徐康森等对纯驴、猪、黄牛和水牛皮胶的氨基酸成分用Wate,。PICO·TAGTM系统进行对比研究。结果四种胶均含有18种氨基酸,其中必需氨基酸有8种。,如按化学结构分类,可分为脂肪族(I)、芳香族(1I)、含硫(Ⅲ)、羟基(Ⅳ)、碱性类(V)、酸性类(Ⅵ)及亚氨基酸(Ⅶ)等7类。结果表明,阿胶的11,in,IV,v类氨塞酸含塞明显占优势。ff~vI,Ⅶ类氨基酸含量略低于其他皮胶,I类氨基酸与其他皮胶含量差异不大(表4~5、表4—6)。
表4—5 阿胶以侧链基团分类的可信度与变异系数
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┃侧链基团类别 ┃ 可信限 ┃CV(%) ┃侧链基团类别 ┃ 可信限 ┃cv(%) ┃
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┃ I 4甚氢基酸 ┃ 41.94士1.72 ┃ 3.92 ┃ V/总氨基酸 ┃16.04土O.22 ┃ 1.32 ┃
┃ Ⅱ聪氨基酸 ┃ 6.24士O.25 ┃ 3.88 ┃ Ⅵ∥总氨基酸 ┃14.72=t=O.20 ┃ 1.31 ┃
┃ m_总氨基酸 ┃ 3.34±O.21 ┃ 5.86 ┃ Ⅶ/总氨基酸 ┃12.63士0.2l ┃ l_55 ┃
┃ Ⅳ/总基氨基酸 ┃ 7.04士O.09 ┃ 1.24 ┃ ┃ ┃ ┃
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注:I.CIy,Ala,I。eu,11e;Ⅱ.Ser。Th‘;m.His,Lys,Arg;Ⅳ.Asp,Glu;V.Cys,Met
Ⅵ.Phe,(Jyr);Ⅶ.Pro。
表4—6 阿胶的氨基酸(aa)成分按医药上的用途分类结果
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┃ 氨基酸的类别 ┃ 含量(%) ┃ 作用与用途 ┃
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┃ Arg德aa ┃ 8.88 ┃解氨毒 ┃
┃ Glu/总aa ┃ 10.20 ┃解氨毒、消化道溃疡 ┃
┃ Met∥暮aa ┃ 2.70 ┃抗脂肝、解毒 ┃
┃ Cyt聪aa ┃ O.64 ┃抗脂肝、解毒 ┃
┃ His/总aa ┃ 1.94 ┃消化道溃疡、贫血、心绞痛、风湿性关节炎 ┃
┃ Lys/总aa ┃ 5.20 ┃促进生长使儿童增加身高体重、促进钙吸收 ┃
┃ Gly/总aa ┃ 21.14 ┃中乖G胃酸过多 ┃
┃ ’必需aa 4毒aa ┃ 28.88 ┃外伤、烧伤、大手术后营养补给、急救 ┃
┃ 必需aa月}必需aa ┃ 40.76 ┃外伤、烧伤、大手术后营养补给、急救 ┃
┃ 一半必需aa/j惠aa ┃ 12.40 ┃外伤、烧伤、大手术后营养补给、急救 ┃
┃ …支链aa德aa ┃ 12.64 ┃慢肝、肝功能临床诊断指标 ┃
┃ 支链aa傍香族aa ┃ 2.03 ┃慢肝、肝功能临床诊断指标 ┃
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。Lys,Try,Phe。Me,’I’hr。Leu,I Ieu,VaI;。。Cys,Tyr。Agr。His;…Va,Leu,l leuo
从表4—4、表4—5和表4—6中看出,由于阿胶样品的来源不同,分析方法、操作人员等因素的影晌,分析所得的氨基酸数量、含量有差异,故表中所列氨基酸分析结果只供研究者参考,不作为阿胶的质量控制标准。阿胶中氨基酸数量、含量有待于进一步的研究。
(二)微量元素分析
采用发射光谱法和原子吸收法等测定阿胶中的微量元素。经微量元素分析可知,阿胶中含有27种微量元素,主要是K、Be、Nb、Na、Ce、Ni、Al、Co、Sc、Fe、Cr、Sr、Mg、Cu、Th、Ca、Ga、Tl、Zn、La、V、P、Li、Y、Ba、Mn、Yb,其中必需微量元素有Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Cr、Ni、Vr、sr等9种。目前国际公认的必需微量元素为16种。尤其是铁、铜、锌、锰、锶等微量元素含量丰富。又如Li的含量也极高,常量元素钠、镁、钙、钾等均有,有害元素未检出。
陈定一等对山东阿胶、宁夏阿胶、张家口阿胶、北京阿胶等进行了21种微量元素分析测定。精密称取样品O.5克于25毫升消化管中,先后依次加入3毫升浓硫酸、3毫升浓硝酸及1毫升高氯酸。在电热石墨消化炉上先进行低温消化(恒温60℃),待最烟冒尽后升至80℃直至呈棕黄色澄明液,然后转移至50毫升容量瓶并定容,上机分析。结果四种阿胶中均含有20种微量元素(表4—7①)。
刘良初对新疆阿胶、北京阿胶、山东阿胶采用发射光谱法和原子吸收光谱法(仪器:日立170一50型原子吸收光谱仪)进行了17种微量元素测定。发射光谱和原子光谱法样品制备:取阿胶粉末适量,按药典法制成灰分,供发射光谱法测定;另取灰分约10毫克,加稀盐酸5毫升,溶解.,加水稀释过滤,滤液再稀释成约1微克/毫升,供原子吸收测定。结果山东阿胶中含有14种微量元素(见表4—7⑦)。
孟正木等采用容量法、火焰法、原子吸收光谱法对山东阿胶、新疆鹿角胶进行了14种微量元素测定,结果丽种胶中均含有14种微量元素(见表4—7③)。 _
表4—7 不同来源阿胶中微量元素分析结果汇总表
元素名称
Fe(%)Ca(%)Mg(%)K(%)Na(%)Ti(%)Mn(%P(%)Al(%)Ba(rag几)Cd(mg儿Co(rag/l。)Cr(mg/I.)
杨福安等采用发射光谱法和原子吸收法对阿胶进行了27种微量兀素分析。发射光谱及原子吸收光谱法样品制备:取阿胶粉末适量,按药典法制成灰分,供发射光谱测定;另取灰分约10毫克。加稀盐酸5毫升,溶解,加水稀释过滤,滤液再稀释成约1微克/毫升,供原子吸收测定。经微量元素分析,阿胶内含有27种微量元素(表4—8)。
表4—8 阿胶中微量元素分析结果一览表(mgIL)
注:此结果只对样品负责。仅供参考。——
从表4—7、表4—8中看出,由于阿胶样品的来源不同,分析法、操作人员等因素的影响,分析所得的微量元素的种类、含量有差异,故表中所列微量元素分析结果只供研究者参考,不作为阿胶的质量控制标准。阿胶中微量元素的种类、含量有待于进一步的研究。
I三)活性成分分析
透明质酸(HA)、硫酸皮肤素(Ds)也可能成为阿胶的有效成分。
最近,经有关科研单位对阿胶进行了分析,发现阿胶中有一种叫含糖胺聚糖类一硫酸皮肤素(dermatan sulfate)的成分,这种成分在国际上已有出售,价格昂贵,主要用于治疗心血管疾病。
硫酸皮肤素的测定;按1:7(w/v)加0.4摩尔醋酸钾溶液(pH7.8)混匀,加链酶菌蛋白酶(相当于底物量1%~2%),50~C水解4小时,加前量之半的酶保温过夜,离心,取上清液0.1毫升加水稀释至1.0毫升,加染料天青工试液(50微克/毫升)1毫升,以岛津紫9~-260型分光光度计536纳米测吸收度,以标准品配铷标准液,绘标准曲线,由标准曲线计算含量。经研究发现,驴皮中含有这种成分较高,在2~4毫克/100克,但受工艺及生产条件的影晌,非常易被破坏。我们曾经对几家阿胶厂生产的阿胶进行研究分析,发现该成分的含量在1~4毫克/100克不等。http://s6/bmiddle/6e106fd2ga8c62ab17005&690
另外,在此项研究的同时,还发现阿胶中含有一种叫多糖的活性成分,这种成分名称尚未确认。
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