CLIP-seq,即紫外交联免疫沉淀结合高通量测序(crosslinking-immunprecipitationandhigh-throughput
sequencing),是一项在全基因组水平揭示RNA分子与RNA结合蛋白相互作用的革命性技术。其主要原理是基于RNA分子与RNA结合蛋白在紫外照射下发生耦联,以RNA结合蛋白的特异性抗体将RNA-蛋白质复合体沉淀之后,回收其中的RNA片段,经添加接头、RT-PCR等步骤,对这些分子进行高通量测序,再经生物信息学的分析和处理、总结,挖掘出其特定规律,从而深入揭示RNA结合蛋白与RNA分子的调控作用及其对生命的意义。
CLIP-seq技术由于可以高通量的研究蛋白在体内与RNA的结合情况,极大的促进了蛋白质-RNA相互作用的研究。最近,这项技术也被应用到microRNA靶标鉴定等工作中。由于该技术需要非常强的RNA操作背景,到目前为止世界上成功掌握该技术的实验室很少。生命之美首席科学家、原武汉大学生命科学院教授张翼博士与她的研究组已成功完成了四个蛋白的CLIP-seq研究,包括通过CLIP-seq完成了PTB蛋白新的可变剪接调控机制的发现。
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实验流程
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高通量测序仪
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