油镜的使用和细菌的简单染色法

　　〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术；观察细菌的基本形态；学习观察细菌的运动性的基本方法。

　　〔基本原理〕

　　1. N·A=n·sinα 

　　2. D=λ/2N.A

　　3. 目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率。已经分辨的物体不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。

　　4. 用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。

　　〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培养18小时左右的B.subtilis.  S.arueus菌斜面培养物；无菌水、生理盐水。

　　〔方法步骤〕：

（一） 油镜的使用

镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中　　聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形　　在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油　　油镜转入正下方　　　侧视小心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）　粗调器徐徐下降载物台（密切注视视野，当捕捉到物像时，立即用细调器校正）　仔细观察并绘图

取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油　　擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指辅助，迅速拭擦一、二次）　　　用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯（2-3次）。

（二） 细菌的简单染色法：涂片　　干燥　　火焰固定　　染色　　水洗　　干燥　　油镜观察

（三） 细菌运动性的观察　取洁净盖玻片，四周涂上凡士林　　　滴加一小滴菌悬液　　凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上　　翻转观察

　　〔结果分析〕

　　1、画一圆圈表示视野，选取所观察的微生物绘图，注意特殊结构、形状和排列。（描绘时按视野实际大小5－10倍绘制）

　　　　菌名：大肠杆菌　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　菌名：金黄色葡萄球菌

　　　　放大倍数：100×10（×5）　　　　　　　　　              放大倍数：100×10（×5）

　　　　特殊结构：无                                            特殊结构：无 

　　视野观察下微生物的形态

　　2、油镜使用时为什么必须干燥装片？

　　防止水油分层，光受到折射而影响油镜性能的发挥

　　〔实验讨论〕

　　首次实验中有几个要点：一是按无菌操作取用菌；二是涂片技术的掌握；三是油镜使用技术。凡实验中学生的所思所想，如无菌操作技术要点、自行处理实验材料、失败与思考等均可进行讨论（如涂片时蒸馏水不宜过多、取用菌时防止菌被灼烫变形、取菌宜少不宜多等均是可以讨论的内容）。